鱼腥草总酚和黄酮含量测定及其体外抗氧化能力研究

论文摘要

鱼腥草为常用中药,其原植物为三白草科植物蕺菜（Houttuynia cordata Thunb.）,是国家卫生部正式确定的药食两用植物资源之一。自古以来,鱼腥草都是人们喜爱的特色蔬菜之一。多酚类物质广泛存在于植物中,既可影响食物的风味（多酚味酸、涩）,同是也与其保健功能密切相关。而多酚中的黄酮类物质更是与抗氧化、抗心血管疾病、抗肿瘤等生物活性密切相关,并且是未来重要的天然染料。四川具有丰富的鱼腥草资源,在野生环境下经长期演变形成了不同的生态类型（居群）,对鱼腥草多酚和黄酮含量及其抗氧化活性进行比较,对开发利用鱼腥草资源,选育营养保健价值高、口感好适合作食用的鱼腥草品种具有指导意义。本研究对鱼腥草总酚的提取和测定方法进行了探讨,比较了鱼腥草不同部位以及来源不同的鱼腥草材料叶片总酚和黄酮含量及其各自体外抗氧化活性。主要研究结果如下：1.运用乙醇、甲醇、丙酮和水等4种不同溶剂超声提取鱼腥草叶片,比较不同时间提取物用Folin-Ciocalteu法测得的吸光度值。并以乙醇2h提取液为对象研究不同碳酸钠溶液、Folin-Ciocalteu显色剂加入量、反应温度及时间对提取液吸光度大小及稳定性的影响。结果表明甲醇提取效率最高,其次为乙醇、丙酮和水；理想的提取时间是2h。适宜测定方法为采用0.5 mL提取液,依次加入2.0 mL 20%碳酸钠缓冲液和1.5 mL Folin-Ciocalteu显色剂,蒸馏水定容至50.0mL。在55℃保温1.5 h,测定波长λ=760nm处的吸光度。该方法比较快速、准确和稳定,适合推广。2.选用W01-100和W01-94两份鱼腥草材料,分别测定其叶、花、茎和根等4个不同部位的总酚、黄酮等含量,以及DPPH（1,1-二苯基苦基苯肼）值、抗p胡萝卜素漂白能力和ABTS（2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸））值等体外抗氧化活性指标。结果发现鱼腥草不同部位总酚含量变幅为1.90-10.26mg gallic acid g-1 dw；黄酮含量变幅为0.751～12.4 mg rutin g-1 dw；DPPH值变幅为84.7～248μM trolox g-1 dw；抗β胡萝卜素漂白能力大小在19.62～88.62%之间；ABTS值范围在78.4～218μM trolox g-1 dw之间。体外抗氧化活性（DPPH值、抗β胡萝卜素漂白能力和ABTS值）与总酚和总黄酮含量变化趋势一致,在各器官中的表现为：花=叶>茎>根。参试的两份材料间各部位总酚及体外抗氧化活性均无显著差异。鉴于鱼腥草不同部位总酚和体外抗氧化活性的差异,建议在使用鱼腥草时分别对不同部位进行生物活性评价。3.16份综合农艺性状好的鱼腥草材料（含1份峨眉蕺菜）的叶片总酚和黄酮含量及体外抗氧化活性存在丰富变异。其总酚含量在7.01～15.0 mg gallic acid g-1 dw间变化；总黄酮含量变异范围为3.56～11.0 mg gallic acid g-1 dw；DPPH值最小为84.7μM trolox g-1 dw,最大为248μM trolox g-1 dw；而ABTS的变幅为78.4～218μM trolox g-1 dw.其中峨眉蕺菜无论总酚、总黄酮含量还是体外抗氧化活性均较低。鱼腥草材料染色体数目与总酚含量及体外抗氧化活性相关不相著,而总酚、黄酮含量及体外抗氧化活性的指标间相关性均达极显著水平。以16份材料的总酚和黄酮含量、DPPH以及ABTS值进行聚类分析,按欧氏距离大于70可将16份材料分为两类。其中Ⅰ类包含11份材料（含峨眉蕺菜）,其多酚和黄酮含量低,抗氧化能力弱。Ⅱ类包含5份材料,其多酚和黄酮含量高,体外抗氧化能力强。这五份材料分别为W01-52、W01-99、W01-94、W01-98和W01-100。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 文献综述
• 1.1 鱼腥草的多酚及黄酮成分
• 1.2 鱼腥草多酚及黄酮的抗氧化活性及相关临床药理活性
• 1.3 多酚及黄酮化合物的提取分离和纯化
• 1.4 总酚、黄酮及抗氧化活性的测定
• 1.4.1 总酚及黄酮的测定方法
• 1.4.2 抗氧化能力的评价方法
• 1.5 影响鱼腥草多酚及黄酮含量的因素
• 2 立题依据
• 3 材料与方法
• 3.1 供试材料
• 3.2 总酚的提取和测定方法研究
• 3.2.1 试剂与仪器
• 3.2.2 样品的制备
• 3.2.3 提取溶剂及时间选择
• 3.2.4 Folin-Ciocalteu比色法条件研究
• 3.2.5 标准曲线的制作
• 3.2.6 Folin-Ciocalteu比色法方法评价
• 3.3 鱼腥草不同部位多酚及抗氧化能力评价
• 3.3.1 试剂与仪器
• 3.3.2 鱼腥草多酚及黄酮的提取
• 3.3.3 总酚的测定
• 3.3.4 黄酮的测定
• 3.3.5 DPPH法测定抗氧化活性
• 3.3.6 β胡萝卜素测定抗氧化能力
• 3.3.7 ABTS法测定抗氧化能力
• 3.4 不同居群鱼腥草总酚及体外抗氧化活性研究
• 3.4.1 试剂与仪器
• 3.4.2 方法
• 4 结果与分析
• 4.1 鱼腥草多酚的提取方法及总酚测定方法研究
• 4.1.1 提取时间及溶剂的选择
• 4.1.2 Folin-Ciocalteu比色法条件的确定
• 2CO₃（20%）用量对总酚测定的影响'>4.1.2.1 Na₂CO₃（20%）用量对总酚测定的影响
• 4.1.2.2 Folin-Ciocalteu显色剂加入量的选择
• 4.1.2.3 反应温度和时间的选择
• 4.1.2.4 标准曲线制作
• 4.1.2.5 方法评价
• 4.2 鱼腥草不同部位总酚及抗氧化能力
• 4.2.1 总酚含量
• 4.2.2 黄酮含量
• 4.2.3 DPPH自由基清除能力
• 4.2.4 抗β胡萝卜素漂白能力
• 4.2.5 ABTS自由基清除能力
• 4.3 不同鱼腥草资源材料多酚及体外抗氧化活性研究
• 4.3.1 总酚含量
• 4.3.2 黄酮含量
• 4.3.3 DPPH值
• 4.3.5 ABTS值
• 4.3.6 不同鱼腥草材料总酚及体外抗氧化活性的关系
• 5 结论与讨论
• 5.1 鱼腥草总酚的提取和测定方法
• 5.2 鱼腥草不同部位总酚、黄酮含量及抗氧化能力评价
• 5.3 不同鱼腥草资源材料总酚、黄酮含量及抗氧化能力评价
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文