转LTP和TR1基因大豆的获得及双元载体的构建

论文摘要

大豆（Glycine max （L.） Merr.）,是重要的油料、食用和饲料作物,也具有广泛的工业用途。基因工程作为一种新的育种方法,已经在很多作物中得到应用。目前常用的大豆转化方法主要有农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、电激法、聚乙二醇法等。最常用的两种方法是农杆菌介导法和基因枪法。本研究中,采用根癌农杆菌介导的大豆子叶节转化方法,分别将植物脂质转运蛋白基因LTP和耐热基因TR1转入大豆中,各获得6棵和12棵阳性植株。其中,转LTP大豆的丛生芽诱导率为73.74%,植株再生率为9.02%,转化率为0.8%。转TRl大豆的丛生芽诱导率为58.31%,植株再生率为13.68%,转化率为0.86%。与已有报道相比,丛生芽的诱导率较高,但是再生率和转化率较低,体系仍需进一步优化。为了消除抗生素选择标记基因带来的生物安全性问题,构建了耐热基因TR1的双T-DNA双元载体pSB130-TR1,用于转化大豆,为培育不含抗生素选择标记基因的转基因大豆新材料奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第一章 文献综述
• 1.1 转基因大豆发展概况
• 1.1.1 大豆简介
• 1.2 转基因大豆方法研究概况
• 1.2.1 农杆菌介导法
• 1.2.2 基因枪法
• 1.2.3 花粉管通道法
• 1.2.4 其他方法
• 1.3 LTP基因
• 1.4 TR1基因
• 1.5 去除选择标记基因的策略
• 1.6 研究的目的与意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 大豆材料
• 2.1.2 质粒和菌种
• 2.1.3 实验试剂
• 2.1.4 主要实验仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 TR1双T-DNA双元载体的构建
• 2.2.2 质粒DNA的提取与转化
• 2.2.3 农杆菌介导的大豆遗传转化
• 第三章 结果与分析
• 3.1 转LTP基因大豆植株的获得及鉴定
• 3.1.1 转LTP基因大豆的获得
• 3.1.2 转基因大豆的PCR检测
• 3.2 TR1基因的生物信息学分析
• 3.2.1 TR1编码序列、蛋白基本信息
• 3.2.2 TR1亲水\疏水结构域及跨膜结构域预测
• 3.2.3 TR1蛋白保守结构域预测
• 3.2.4 TR1蛋白二级结构预测
• 3.2.5 不同物种中TR1同源蛋白亲缘关系分析
• 3.3 大豆子叶节再生体系的建立
• 3.3.1 丛生芽的诱导
• 3.3.2 芽伸长及生根
• 3.4 转TR1基因大豆植株的获得及鉴定
• 3.4.1 转TR1基因大豆
• 3.4.2 转基因大豆的PCR检测
• 3.5 TR1双T-DNA区双元载体的构建和大豆的转化
• 3.5.1 TR1双T-DNA区双元载体的构建
• 3.5.2 潮霉素筛选浓度的确定及大豆的转化
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 附录
• 致谢