川楝子抑制破骨细胞活性及化学成分的研究

川楝子抑制破骨细胞活性及化学成分的研究

论文摘要

川楝子Fuctus Toosendan为楝科植物川楝Melia toosendan Sib.et Zucc.的干燥成熟果实,主产于四川、贵州、湖北、湖南、河南及甘肃南部等。具有舒肝行气止痛,驱虫的作用;传统用于胸胁、腕腹胀痛,疝痛,虫积腹痛等。川楝子用70%的乙醇进行提取,经系统溶剂萃取法进行极性划分。氯仿层经反复硅胶柱色谱、制备薄层色谱和反复重结晶等手段从川楝子中分离得到7个化合物,并根据化合物的性质,利用1H-NMR、13C-NMR和MS等方法以及与文献报道对比鉴定了其中的6个化合物的化学结构,分别为:三十烷-15-醇(Ⅰ)、豆甾醇(Ⅱ)、β-谷甾醇(Ⅲ)、△5,6-异川楝素(Ⅳ)、壬酸十五醇酯(Ⅴ)、己酸十三烷-(12-甲基)-2-醇酯(Ⅵ)。其中化合物Ⅳ为新化合物,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ和Ⅵ为首次从该植物中分离得到。建立了破骨细胞的试验模型,利用RANKL诱导的方法,对破骨细胞的前体细胞RAW264.7细胞进行诱导、分化、成熟等,并通过TRAP染色法观察破骨细胞的形成情况。以活性为导向,结合化学分离手段,对川楝子抑制破骨细胞的生物活性进行研究,确定了其有效部位。结果显示:川楝子提取物的乙醇层具有显著抑制破骨细胞的活性。同时,利用大孔树脂对有效部位进行进一步的分离纯化,得到其有效组分为乙醇-水40~60%和60~80%两个组分,并且40~60%组分的生物活性非常显著,即使在高浓度RANKL诱导下,其对破骨细胞生长的抑制率也在95%以上。本论文对抑制破骨细胞活性的研究结果是首次公开报道,对川楝子的进一步研究和开发提供了初步的理论和实验依据。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 1 楝科植物概述
  • 1.1 楝科植物分布概况
  • 1.2 楝科植物化学成分及药理活性概况
  • 2 川楝子概述
  • 2.1 川楝子的特征
  • 2.2 川楝子的化学成分研究
  • 2.3 川楝子的药理活性研究
  • 2.3.1 川楝素的药理研究
  • 2.3.2 川楝子的药理研究
  • 2.4 川楝子的临床应用
  • 2.5 川楝子的不良反应
  • 3 骨质疏松与破骨细胞
  • 3.1 破骨细胞与骨质疏松的关系
  • 3.2 骨质疏松的治疗
  • 4 研究目的及意义
  • 5 小结与讨论
  • 第一章 川楝子抑制破骨细胞活性的研究
  • 1 破骨细胞的来源
  • 2 破骨细胞的培养
  • 3 破骨细胞模型的建立
  • 3.1 破骨细胞培养
  • 3.2 破骨细胞形成的研究
  • 3.2.1 样品对破骨细胞形成的研究
  • 3.2.2 阳性对照
  • 3.2.3 阴性对照
  • 3.3 TRAP染色法
  • 4 川楝子活性部位与活性组分的提取与分离
  • 4.1 实验材料、试剂与仪器
  • 4.1.1 实验材料
  • 4.1.2 试药与试剂
  • 4.1.3 主要仪器
  • 4.2 实验方法及结果
  • 4.2.1 活性部位的研究
  • 4.2.2 活性组分的研究
  • 4.3 小结与讨论
  • 第二章 川楝子化学成分的研究
  • 1 实验材料、试剂与仪器
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 试药与试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验方法及结果
  • 2.1 提取与分离
  • 2.2 实验结果
  • 3 化合物结构鉴定
  • 4 小结与讨论
  • 结果与讨论
  • 参考文献
  • 附图
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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