不同缓冲体系对hemin催化蛋白质硝化和蛋白质氧化的影响

论文摘要

蛋白质酪氨酸硝化,是一种普遍存在的蛋白质翻译后修饰,是机体在氮氧化物存在条件下氧化损伤的特殊形式。蛋白质硝化的同时,也会伴随蛋白质氧化。硝化和氧化作用能造成蛋白质结构以及功能的改变,已在许多生理和病理状态下检测到它们的存在。本文采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）、分光光度法（spectrophotometry）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）对hemin-NaNO2-H2O2体系在五种生物化学和细胞生物学研究中常用的缓冲溶液:碳酸缓冲液（NaHCO3-CO2）、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液（PBS）、柠檬酸（Citrate-Citric acid）和Hepes缓冲液中引起的蛋白质硝化和蛋白质氧化作用进行了比较,并测定其硝化作用和氧化作用与pH值的关系。实验结果表明,在五种缓冲溶液中,氯高铁血红素（hemin）均能够有效催化NO2--H2O2体系引起的牛血清白蛋白（BSA）的硝化和氧化,并且其导致的BSA硝化程度和氧化程度随pH值变化趋势相反:硝化程度随pH值的升高而降低;氧化程度随pH的升高而升高。在相同pH值（7.0）情况下,五种缓冲溶液中,BSA的硝化、氧化程度也有差异:Tris-HCl溶液中硝化作用最强,PBS、Citrate-Citric acid、NaHCO3-CO2缓冲体系次之,而在Hepes体系中硝化程度最弱。进一步研究表明,不同缓冲溶液可能通过对亚硝酸盐的氧化的抑制而降低硝化。NaHCO3-CO2和PBS缓冲溶液中氧化作用最强,Citrate-Citric acid溶液,Tris-HCl溶液次之,在Hepes溶液中氧化程度最小。上述研究结果表明,不同缓冲溶液对hemin-NaNO2-H2O2引起的蛋白质硝化和氧化程度不同,酸性条件下有利于蛋白质酪氨酸硝化,而碱性条件有利于蛋白质氧化。值得注意的是,Hepes缓冲溶液中,氧化和硝化程度均不高,提示在进行细胞或其他体外氧化实验时,尽量不要用Hepes作为缓冲剂,以免影响研究结果的正确性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 铁卟啉
• 1.2 蛋白质硝化的研究进展
• 1.3 蛋白质氧化的研究进展
• 1.4 溶液介质对蛋白质硝化和氧化作用的影响
• 1.5 本文研究目的与主要内容
• 2 材料和方法
• 2.1 主要试剂和仪器
• 2.2 主要溶液的配置
• 2.3 实验内容
• 3 实验结果
• 3.1 不同缓冲体系中蛋白质硝化的检测
• 3.2 不同缓冲体系中蛋白质氧化的测定
• 3.3 相同pH值（7.0）时不同缓冲溶液中蛋白质硝化和氧化作用的比较
• 3.4 不同缓冲体系中NaNO 2浓度的测定
• 3.5 不同缓冲体系对hemin降解的影响
• 4 讨论
• 5 全文总结
• 5.1 主要研究成果
• 5.2 创新之处
• 致谢
• 参考文献
• 附录主要缩写词表（按字母顺序排列）