论文摘要
近年来,环境内分泌干扰物（EEDs）或内分泌干扰化学物（EDCs）对人类生殖健康的影响已引起各国政府和许多学者的普遍关注。在美国国家环保局（USEPA）公布的EDCs中,农药几乎占了三分之二。中国作为一个农业大国,农药生产和使用量逐年增加,其中氰戊菊酯作为一种常用的拟除虫菊酯类农药,因其能在环境中相对快速降解等优点而被广泛使用。然而,很多研究结果表明,氰戊菊酯可以对生殖内分泌系统产生损害作用。本研究利用体外培养小鼠睾丸间质瘤细胞株（MLTC-1）为染毒模型,侧重于研究氰戊菊酯对孕酮合成的影响,并初步探讨了cAMP和IGF信号通路在氰戊菊酯暴露导致类固醇激素合成变化中的作用。第一部分氰戊菊酯对类固醇激素合成的影响目的观察氰戊菊酯对类固醇激素合成的影响。方法1.采用体外培养的小鼠睾丸间质瘤细胞株（MLTC-1）作为染毒模型。2.MTT法测定氰戊菊酯对MLTC-1细胞活力的影响,确定染毒剂量。3.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1 24h,在培养液中加入hcG（0.1U/L）继续染毒4h,用放射免疫法（RIA）检测培养液上清中的孕酮水平。4.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1 24h,吸弃培养液,继续用不含氰戊菊酯的培养液培养24h后,培养液中加入hCG继续培养4h,RIA检测培养液上清中的孕酮水平。结果1.根据MTT结果确定氰戊菊酯染毒剂量分别为:0、1、5、25和125μmol/L。2.在hCG刺激下,氰戊菊酯显著抑制孕酮的合成,且呈剂量-反应关系。在125μmol/L组,孕酮下降了87.6%。3.撤药继续培养24h后,各剂量组的孕酮水平无显著性差异。结论氰戊菊酯显著抑制MLTC-1类固醇激素的合成,撤药后MLTC-1细胞合成类固醇激素的能力基本恢复。第二部分氰戊菊酯抑制孕酮合成与cAMP依赖的蛋白激酶信号通路目的初步探讨cAMP信号通路在氰戊菊酯抑制孕酮合成中的作用。方法1.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h,培养液中分别加入CT（30ng/ml）、forskolin（10μmol/L）和hCG（0.1U/L）继续染毒4h,RIA法检测细胞培养上清中的孕酮和cAMP水平。2.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h,培养液中分别加入8-Br-cAMP（500μmol/L）、22R-HC（25μmol/L）和孕烯醇酮（10μmol/L）继续染毒4h,RIA法检测细胞培养上清中的孕酮水平。3.real-time RT-PCR测定类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）mRNA表达水平的变化。4.蛋白印迹法（western blot）测定StAR、P450scc蛋白表达水平的变化。结果1.在CT或forskolin刺激下,氰戊菊酯均显著抑制孕酮的合成。2.在hCG刺激下,氰戊菊酯显著抑制MLTC-1细胞内cAMP水平。但在CT或forskolin的刺激下,这种抑制作用消失。3.培养液中加入8-Br-cAMP后,氰戊菊酯仍抑制孕酮的合成。4.在培养液中加入22R-HC后,氰戊菊酯仍抑制孕酮的合成;而加入孕烯醇酮之后,氰戊菊酯对孕酮的抑制作用消失。5.氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h后,StAR mRNA和蛋白水平均下降。6.氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h后,P450scc mRNA和蛋白水平均呈剂量-效应关系下降。结论氰戊菊酯显著抑制MLTC-1细胞孕酮的合成,其机制可能涉及cAMP-依赖的蛋白激酶信号通路。此外,氰戊菊酯还抑制胆固醇的跨线粒体膜转运及P450scc的活性。第三部分氰戊菊酯抑制孕酮合成与IGF信号通路目的初步探讨IGF信号通路在氰戊菊酯抑制孕酮合成中的作用。方法1.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h,培养液中加入hCG继续染毒4h,RT-PCR检测IGF-1 mRNA的水平的变化。2.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h,培养液中分别加入hCG、hcG+LY294002、hCG+U0126继续染毒4h,RIA法检测细胞培养上清中的孕酮水平。3.不同浓度氰戊菊酯染毒MLTC-1细胞24h,培养液中加入hCG继续染毒,western blot测定ERK1/2蛋白磷酸化表达水平的变化。结果1.随着氰戊菊酯染毒浓度的增加,在1μmol/L和更高剂量组,IGF-I mRNA的量显著降低。2.培养液中加入LY294002后,孕酮的合成仍能被氰戊菊酯抑制且其下降趋势与不加LY294002时类似;培养液中加入U0126后,孕酮水平的下降趋势较不加时更明显。3.氰戊菊酯能抑制ERK1/2蛋白磷酸化表达。结论氰戊菊酯抑制MLTC-1细胞孕酮合成的机制可能还涉及IGF信号通路。氰戊菊酯可能干扰了上游IGF-I mRNA的表达进而抑制了ERK1/2的磷酸化表达。
论文目录
相关论文文献
- [1].类固醇激素耳内给药治疗突发性耳聋的临床效果[J]. 临床合理用药杂志 2020(22)
- [2].类固醇激素受体与中性粒细胞功能的研究进展[J]. 吉林畜牧兽医 2015(04)
- [3].类固醇激素影响骨髓间充质干细胞生物学特性的研究进展[J]. 中国实验诊断学 2010(03)
- [4].合成类固醇激素的检测技术研究进展与思考[J]. 广州化工 2010(06)
- [5].类固醇激素在变应性鼻炎中的局部应用现状[J]. 西部医学 2008(02)
- [6].虎粪便类固醇激素检测及影响因素的评估[J]. 野生动物学报 2018(02)
- [7].血液中类固醇激素分析方法的研究进展[J]. 中草药 2018(15)
- [8].全膝关节置换术术中注射类固醇激素的系统评价（英文）[J]. 中国矫形外科杂志 2015(06)
- [9].类固醇激素的常用检测方法及优缺点[J]. 电子测试 2013(12)
- [10].藏羚粪便中类固醇激素的高效液相色谱分析[J]. 安徽农业科学 2011(21)
- [11].气相色谱-质谱分析新生儿尿液中类固醇激素方法的建立[J]. 临床儿科杂志 2010(08)
- [12].大熊猫粪团表层和内部类固醇激素含量比较[J]. 经济动物学报 2010(04)
- [13].类固醇激素联合甲氨喋呤治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎一例[J]. 中华乳腺病杂志(电子版) 2010(06)
- [14].圈养林麝粪便类固醇激素保存时效性研究[J]. 四川动物 2011(03)
- [15].二噁英暴露对成年男性血清类固醇激素的影响[J]. 中国环境科学 2018(06)
- [16].类固醇激素治疗婴幼儿血管瘤的经验[J]. 中国口腔颌面外科杂志 2009(03)
- [17].野生动物粪样内类固醇激素保存方法研究进展[J]. 特产研究 2008(02)
- [18].QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定牛奶和奶粉中42种类固醇激素[J]. 食品科学 2018(08)
- [19].类固醇激素、皮质激素、醛固酮、糖皮质激素的解释[J]. 中国疼痛医学杂志 2017(09)
- [20].温度对半滑舌鳎生长及性类固醇激素水平的影响[J]. 水产学报 2014(11)
- [21].从类固醇激素生成探讨维生素D轴与肾虚证相关性[J]. 时珍国医国药 2014(09)
- [22].类固醇激素受体在扬子鳄睾丸表达的免疫细胞化学研究(英文)[J]. 安徽师范大学学报(自然科学版) 2008(06)
- [23].黄体类固醇激素受体的结构功能及其生理调节[J]. 中国细胞生物学学报 2019(08)
- [24].同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中类固醇激素[J]. 食品安全质量检测学报 2018(07)
- [25].氯化汞对睾丸间质细胞类固醇激素合成影响的体外研究[J]. 环境与职业医学 2015(10)
- [26].鼓室内灌注类固醇激素治疗突发性耳聋的临床研究[J]. 中外医学研究 2013(36)
- [27].胶束电动色谱法快速测定鱼血液中的类固醇激素[J]. 浙江师范大学学报(自然科学版) 2013(03)
- [28].类固醇激素联合腕管切开松解术的疗效观察[J]. 中国现代应用药学 2019(08)
- [29].围产期二英暴露对学龄前儿童类固醇激素的影响[J]. 环境科学学报 2019(08)
- [30].17α-甲基睾丸酮和来曲唑对尼罗罗非鱼类固醇激素合成酶基因表达的影响[J]. 水产学报 2011(09)