microRNA-15a在胃癌中的表达及其作用机制研究

论文摘要

[背景与目的]：miR-15a是一个具有抑癌基因功能的、在肿瘤发生发展中起着重要作用的microRNA,能通过抑制BCL-2、Cyclin D1等靶基因的表达从而调控细胞周期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。miR-15a在慢性淋巴细胞白血病及卵巢癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等肿瘤中表达显著降低。然而目前胃癌中尚未见相关报道。本实验旨在研究miR-15a在胃癌中的表达及其作用和调控通路。[方法]：采用荧光定量PCR技术检测胃癌组织、癌旁正常胃粘膜组织、胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、AGS、MKN-45、MKN-28及正常胃粘膜细胞株GES-1中miR-15a的表达水平。构建pri-miR-15a真核表达载体,稳定转染胃癌细胞MKN-45,筛选出miR-15a高表达的阳性细胞克隆。采用MTT、transwell及侵袭实验研究miR-15a对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭活性的影响；将转染后的胃癌细胞接种至裸鼠背腹部皮下,观察miR-15a对肿瘤生长的影响。采用荧光定量PCR技术检测转染后胃癌细胞中miR-15a靶基因Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin E、FGF2、FGF7、FGFR1、Bmi-1、C-myb、WNT3A、BRCA1的表达情况。[结果]：miR-15a在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常胃粘膜组织（0.0014±0.00091 VS 0.0022±0.000183,P<0.05）；且胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、AGS、MKN-45、MKN-28中miR-15a的表达水平也较正常胃粘膜细胞株GES-1中明显降低。过表达miR-15a对胃癌细胞MKN-45的增殖、迁移及侵袭能力具有显著抑制作用；miR-15a还能有效抑制胃癌肿瘤生长。MKN-45细胞中miR-15a表达上调后,其靶基因Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin E、FGF2、FGF7、FGFR1、Bmi-1、C-myb、WNT3A的表达均有所下调,其中以Bcl-2、Cyclin D1、Bmi-1、FGF2表达下调最为显著;miR-15a对BRCA1的表达无明显作用。[结论]：miR-15a在胃癌组织及细胞中表达水平降低；miR-15a主要通过调控靶基因Bcl-2、Cyclin D1及Bmi-1的表达,对MKN-45胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭活性及肿瘤生长起抑制,从而在胃癌中起着抑癌基因作用。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、引言
• 四、正文:mieroRNA-15a在胃癌中的表达及其作用机制研究
• 第一部分 miR-15a在胃癌中的表达水平研究
• 1. 材料与设备
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 小结
• 第二部分 miR-15a重组质粒的构建
• 1. 材料与设备
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 小结
• 第三部分 体内外研究miR-15a在胃癌中的作用
• 1. 材料与设备
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 小结
• 第四部分 miR-15a在胃癌中调控通路的研究
• 1. 材料与设备
• 2. 方法
• 3. 数据分析
• 4. 结果
• 5. 小结
• 讨论
• 参考文献
• 五、综述:micro RNA-15a在胃癌中的研究
• 参考文献
• 六、附件 （主要英文缩略语表）
• 七、致谢