首页> 正文

SWI/SNF染色体重塑复合物在人胚胎干细胞中的功能研究

2020-12-11阅读(1088)

SWI/SNF染色体重塑复合物在人胚胎干细胞中的功能研究

论文摘要

ATP依赖的SWI/SNF染色体重塑复合物是表观遗传学修饰中一个重要的家族,复合物中的Brgl或Brm具有ATP酶活性,它们利用水解ATP释放的能量,来改变染色体的结构从而改变转录调控因子对染色质的可接近性以实现对基因的表达调控。哺乳动物的SWI/SNF复合物对于早期胚胎全能性和多能性细胞的形成是必须的。以往,关于SWI/SNF复合物与胚胎干细胞多能性关系的研究大都是在鼠胚胎干细胞中进行,尚无在人胚胎干细胞中的报道。而我们的基因芯片分析结果显示,在人胚胎干细胞中用RNA干扰技术使BRG1低表达导致的基因表达谱的改变与小鼠胚胎干细胞的不尽相同。另外,我们的Western Blots及实时定量RT-PCR结果显示,在人胚胎干细胞的SWI/SNF复合物以BRG1为主要作用。因此,为了探究SWI/SNF复合物对人胚胎干细胞自我更新及分化的影响,我们建立了稳定干扰BRG1表达的人胚胎干细胞。结果发现,在BRG1低表达7-10天时,人胚胎干细胞已出现了明显的分化表型,流式细胞分析和碱性磷酸酶染色实验也证实了BRG1的低表达确实引起了人胚胎干细胞的分化。同时,实时荧光定量RT-PCR分析显示,BRG1的基因表达被持续降低后,会导致人胚胎干细胞向三个胚层及滋养外胚层细胞不同程度的分化。尽管染色质免疫共沉淀的结果表明BRG1直接作用于多能性相关基因Oct4,但多能性相关基因Oct4和Nanog表达水平的变化在BRG1knockdown的初期并不显著。另外,基因芯片分析、实时荧光定量RT-PCR和染色质免疫共沉淀结果亦表明,在人胚胎干细胞中,BRG1影响和调控细胞周期调控因子的表达,但是流式分析结果尚没有看到BRG1对人胚胎干细胞细胞周期的显著影响,进一步的研究将结合细胞周期阻滞剂及DNA损伤等模型探讨BRG1对细胞周期的调节。综上所述,SWI/SNF染色体重塑复合物对人胚胎干细胞的细胞周期及生长有广泛的影响,是维持干细胞自我更新和多能性必需的。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 综述
  • 第一节 SWI/SNF家族简介
  • 第二节 SWI/SNF与基因的表达调控
  • 第三节 SWI/SNF复合物与胚胎发育
  • 第四节 SWI/SNF复合物与胚胎干细胞
  • 第二章 实验材料和方法
  • 第一节 实验材料
  • 1. 细胞株
  • 2. 细胞培养
  • 3. 质粒和shRNA序列
  • 4. 引物序列
  • 5. 实验试剂和抗体
  • 6. 实验仪器
  • 第二节 实验方法
  • 1. 质粒的小量抽提技术
  • 2. 质粒的大量抽提技术
  • 3. Western-blot技术
  • 4. 逆转录PCR技术和实时荧光定量PCR技术
  • 5. 稳转细胞株的建立与筛选
  • 6. 染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,CHIP）技术
  • 7. 流式细胞技术（Fluorescence Activating Cell Sorter）
  • 8. 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）染色
  • 9. 基因芯片（Microarray）
  • 第三章 实验结果与分析
  • 第一节 人和鼠胚胎干细胞基因表达差异比较
  • 第二节 SNF/SNF复合物与人胚胎干细胞的自我更新
  • 第三节 SWI/SNF复合物与胚胎干细胞的分化
  • 第四节 人胚胎干细胞中SWI/SNF复合物与细胞周期
  • 第四章 总结与讨论
  • 附录
  • 参考文献
  • 感谢

    • 相关论文文献

    • [1].BET bromodomain蛋白在人胚胎干细胞造血分化中的作用研究[J]. 中国实验血液学杂志 2018(04)
    • [2].人胚胎干细胞的研究与应用[J]. 技术与市场 2016(11)
    • [3].从复审角度评析人胚胎干细胞的可专利性[J]. 中国发明与专利 2017(11)
    • [4].医学前沿[J]. 健康管理 2017(04)
    • [5].人胚胎干细胞的临床转化研究进展[J]. 中国细胞生物学学报 2018(S1)
    • [6].烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究[J]. 药学实践杂志 2019(03)
    • [7].人胚胎干细胞建株与维持培养条件的优化[J]. 生命科学研究 2014(04)
    • [8].人胚胎干细胞膜的特异多肽受体研究[J]. 现代生物医学进展 2014(31)
    • [9].人胚胎干细胞建系和培养的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2012(32)
    • [10].人胚胎干细胞转化为肝细胞[J]. 现代医院 2008(08)
    • [11].砷对人胚胎干细胞的作用研究[J]. 内蒙古医学杂志 2019(09)
    • [12].人胚胎干细胞建系的研究进展[J]. 生命科学 2018(08)
    • [13].视点[J]. 东方养生 2012(01)
    • [14].人类胚胎干细胞[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志 2010(06)
    • [15].欧洲进一步明确人胚胎干细胞相关发明不能被授予专利权[J]. 中国发明与专利 2012(02)
    • [16].拟胚体法诱导人胚胎干细胞神经分化的研究[J]. 湖南中医药大学学报 2010(03)
    • [17].十溴联苯醚暴露对人胚胎干细胞分化潜能的影响[J]. 卫生研究 2016(03)
    • [18].人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立[J]. 中国输血杂志 2015(05)
    • [19].人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的初步研究[J]. 临床检验杂志 2013(04)
    • [20].人胚胎干细胞临床应用的问题和解决对策[J]. 实用医学杂志 2008(22)
    • [21].人胚胎干细胞向肌腱细胞分化方法的专家共识[J]. 浙江大学学报(医学版) 2016(02)
    • [22].硅酸钙浸提液促进人胚胎干细胞的肝向分化[J]. 医用生物力学 2019(S1)
    • [23].人胚胎干细胞来源多巴胺前体细胞治疗帕金森病猴[J]. 生命科学 2016(08)
    • [24].最大人胚胎干细胞遗传变异研究结果发布[J]. 生物医学工程与临床 2012(01)
    • [25].人胚胎干细胞分化研究进展[J]. 医学研究与教育 2009(02)
    • [26].金颖课题组在人胚胎干细胞自我更新的维持领域取得新进展[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2017(02)
    • [27].人胚胎干细胞定向诱导分化为内胚层细胞的研究进展[J]. 生命的化学 2016(06)
    • [28].低氧条件下诱导人胚胎干细胞向血管内皮前体细胞的分化[J]. 中国组织工程研究 2014(45)
    • [29].无血清无饲养层人胚胎干细胞向胶质前体细胞的分化[J]. 解剖学报 2011(02)
    • [30].人胚胎干细胞和诱导型人多能干细胞分化的心肌细胞在药物心脏毒性筛选中的应用[J]. 中国细胞生物学学报 2014(01)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  ;  

    SWI/SNF染色体重塑复合物在人胚胎干细胞中的功能研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5