人类泛素结合酶UBE2T、UBE2W和UBE2Z的功能研究

论文摘要

泛素化指泛素蛋白分子与体内其它蛋白形成的共价结合,这种翻译后修饰除了引起经典的26S蛋白酶体依赖的蛋白质降解之外,还涉及一系列的其它重要胞内生理进程。泛素结合酶E2在泛素化系统中具有重要作用,是其中必不可少的中间环节。本论文选取人类肝脏cDNA文库中可能具有泛素结合酶功能的基因UBE2T、UBE2W和UBE2Z进行研究。生物信息学分析表明,UBE2T、UBE2W和UBE2Z都含有完整的泛素结合酶结构域(UBCc结构域),并且呈现高度保守性,与仅由核心结构域构成的第1类泛素结合酶UBE2W不同的是,UBE2T与UBE2Z还具有C末端延伸序列,属于第Ⅱ类泛素结合酶。经原核表达与纯化得到了三者的His融合蛋白,体外实验证实UBE2T和UBE2W在UBE1作为泛素活化酶的条件下具有与泛素分子的结合能力,表明了UBE2T和UBE2W是泛素结合酶家族中的新成员;然而未能在UBE1作为泛素活化酶条件下检测到UBE2Z泛素分子的结合能力。亚细胞定位结果显示UBE2T的C末端延伸序列和UBE2W的活性位点半胱氨酸残基与其进入细胞核密切相关。通过酵母双杂交筛选到了可能与UBE2W进行互作的蛋白,我们挑选了可能与泛素化过程直接相关的属于RING指类泛素连接酶的RNF8和RNF167来作为UBE2W的候选E3进行进一步研究。体内外蛋白互作实验结果都证实了UBE2W与它们之间存在相互作用,并且进一步发现UBE2W能够造成RNF167蛋白的自身泛素化,这可能是一种调节其在细胞内稳定性的机制。此外我们还发现UBE2W对于重要的抑癌基因p53信号通路具有明显的抑制作用,这揭示UBE2W可能与肿瘤的形成有关。尽管还未能找到UBE2W所在泛素通路的最终底物,其对p53信号通路进行调控的分子机制也有待进一步探索,但可以肯定UBE2W在人体内具有非常重要的功能,我们也将开展更深入的研究来揭示UBE2W在人体内的具体作用。

论文目录

• 一、摘要
• 二、Abstract
• 三、英文缩略词
• 四、引言
• 五、材料与方法
• 1.材料与试剂
• 2.方法
• 六、结果
• 1.UBE2T、UBE2W和UBE2Z的生物信息学分析
• 2.MTC Panel表达谱特征
• 3.UBE2T、UBE2W和UBE2Z的亚细胞定位
• 4.UBE2T、UBE2W和UBE2Z的酶活检测
• 5.UBE2W对胞内信号通路影响的检测
• 6.UBE2W下游泛素连接酶的研究
• 七、讨论
• 八、小结
• 九、参考文献
• 十、综述:人类泛素化途径研究进展
• 十一、在读期间发表论文
• 十二、致谢