虎杖免煎冲剂对糖尿病大鼠肾脏RAGE及VEGF表达的影响

论文摘要

目的:观察虎杖免煎冲剂对糖尿病Wistar大鼠血糖、血脂、肌酐清除率、24h尿蛋白定量,以及肾脏病理结构和肾皮质糖基化终末产物受体（RAGE）、血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及RAGE、VEGF在糖尿病肾病中的作用。方法:将36只雄性Wistar大鼠,按体重随机选取8只作为正常组（n=8）,给予普通饲料喂养;其余28只给予高糖高脂饲料喂养4周后,禁食12h,按35mg/kg（体重）链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射,72h后尾静脉取血,血糖≥16.7mmol/L,尿糖+++～++++确定为糖尿病大鼠。成模的26只大鼠按血糖值随机分为模型组（n=9）、虎杖组（n=9）和他汀组（n=8）,成模后即开始灌胃,虎杖组给予虎杖免煎冲剂1.5g/（kg·d）,他汀组给予氟伐他汀7mg/（kg·d）,模型组和正常组给予等量蒸馏水,给药4周。8周末留取大鼠24h尿液并检测其尿肌酐、24h尿蛋白定量;麻醉条件下上腔静脉取血,离心,-20℃保存,测量血生化指标;取肾组织,剥离被膜,称重,固定、包埋、切片、HE染色及电镜下观察肾脏病理改变;免疫组化SABC法检测肾小球RAGE、VEGF的表达水平。结果:（1）一般生化指标的变化与正常组大鼠相比,模型组、虎杖组和他汀组大鼠血糖、胆固醇、甘油三脂、肌酐清除率、24h尿蛋白定量、肾重/体重均显著升高（P＜0.01,P＜0.05）;虎杖组、他汀组大鼠较模型组大鼠肌酐清除率、24h尿蛋白定量、肾重/体重均明显降低（P＜0.01,P＜0.05）,血糖也有所下降,但差异无统计学意义;他汀组大鼠大鼠胆固醇、甘油三脂较模型组明显降低（P＜0.05）。（2）肾组织病理观察结果光镜下观察结果:与正常组大鼠相比,模型组、虎杖组、他汀组大鼠系膜区基质增生,系膜区扩大,肾小球体积（GV）明显增大（P＜0.01）;虎杖组、他汀组较模型组基质增生减轻,GV明显减小（P＜0.01）。电镜下观察结果:正常组大鼠足细胞体积较大,胞质内有丰富的粗面内质网和线粒体。足突细长,排列整齐,基底膜厚度（BMT）正常,均匀一致。模型组大鼠肾小球足突融合明显,足细胞内细胞器部分消失,系膜基质增多,部分BMT明显厚于正常组（P＜0.01）,屏障结构破坏明显。而虎杖组、他汀组大鼠肾小球足突排列较整齐,仅有少量足突融合,BMT薄于模型组（P＜0.01）,厚于正常组（P＜0.01）,屏障结构较完整。（3）肾组织RAGE、VEGF免疫组化染色结果免疫组化染色后,大鼠肾小球出现棕黄色物质为阳性。正常组大鼠肾小球脏层上皮细胞有少量RAGE、VEGF表达,为弱阳性;模型组大鼠肾小球中有明显的RAGE、VEGF表达,肾小球脏层上皮细胞和系膜细胞有大量棕黄色染色,其阳性染色范围及染色深度明显增强,为强阳性;他汀组、虎杖组为阳性表达,其阳性染色范围及染色深度明显低于模型组。与正常组相比,模型组、虎杖组和他汀组大鼠肾小球RAGE、VEGF的表达增强（P＜0.01）;虎杖组、他汀组大鼠肾小球RAGE、VEVF的表达明显低于模型组（P＜0.01,P＜0.05）。（4）相关分析及回归分析模型组大鼠24hUP与RAGE、VEGF、BMT厚度成正相关（r=0.776,P＜0.05;r=0.799,P＜0.01;r=0.800,P＜0.01）,线性多元逐步回归分析方程:24hUP=0.572 RAGE+0.281 VEGF+1.496 BMT,方程的检验有显著性水平（P＜0.05）;VEGF与RAGE的表达成正相关（r=0.743,P＜0.05）,回归方程为VEGF=4.998+0.907 RAGE结论:（1）糖尿病大鼠肾皮质RAGE、VEGF表达特点及相关分析提示RAGE、VEGF增高是DN早期的病理机制之一,两者相互影响,加速了DN的进程。（2）虎杖免煎冲剂可抑制基底膜增厚,下调肾组织中RAGE、VEGF的表达,减少DN早期的肌酐清除率及蛋白尿的排泄,有助于延缓肾小球硬化进程,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与下调RAGE、VEGF有关。（3）虎杖免煎冲剂对糖尿病大鼠可能有降血糖的作用,尚需进一步实验证实。其对血脂的影响不大。（4）氟伐他汀可下调糖尿病大鼠肾组织中RAGE、VEGF的表达水平,减少蛋白尿的排泄,此肾脏保护作用一方面通过调脂实现,另一方面可能与下调RAGE、VEGF有关,需实验进一步证实。总之,氟伐他汀对延缓DN是有作用的。

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