多发性脂囊瘤的KRT17基因突变研究

论文摘要

研究背景多发性脂囊瘤（steatocystoma multiplex,SM,OMIM:184500）是一种少见的皮肤附属器良性肿瘤,临床特征为多发性半球形肤色或淡黄色皮肤囊性损害,好发于躯干部和四肢近心端,常在青春期或成人早期发病,皮疹数目和大小可随年龄增长而不同程度增加。本病多呈常染色体显性遗传,尽管也有诸多散发病例的报道。目前认为该病主要是由KRT17基因的突变所致,同时KRT17基因也是先天性厚甲症2型（Pachyonychia congenital-2,PC-2）的一个致病基因。角蛋白K17常表达于甲床、毛囊外根鞘、皮脂腺和其它附属器,角蛋白有一个由310个氨基酸残基构成的α-螺旋杆状结构域,该结构域由1A、1B、2A和2B四个片段组成。位于1A螺旋起始和2B螺旋末端的序列是高度保守区,对体内10nm中间丝的装配至关重要。KRT17基因定位于17q12-q21,全长5kb,由8个编码蛋白的外显子组成。迄今为止,国内外学者在不同SM家系中共检测到3种不同的突变,目前尚未发现基因型与表型之间的明确相关性。本研究收集了中国汉族人两个多发性脂囊瘤家系,并通过直接测序的方法对这两个家系的成员进行KRT17基因的突变检测。目的检测中国汉族人两个多发性脂囊瘤家系的KRT17基因的致病性突变。方法调查两个中国汉族人多发性脂囊瘤家系情况,收集整理家系资料并采集家系成员血样。提取家系成员和100名正常对照的外周血白细胞基因组DNA,设计覆盖KRT17基因所有外显子编码区的7对引物,采用PCR反应扩增所有外显子编码区及其侧翼序列,通过对PCR扩增产物直接测序进行序列分析。结果通过对中国汉族人多发性脂囊瘤两家系进行突变检测,检测到一个国外曾经报道过的突变c.281G＞A（p.R94H）和一个国内外在多发性脂囊瘤家系中未见报道的突变c.275 A＞G（p.N92S）。而这两个家系中表型正常个体及100个无关正常对照均不存在这样的突变。结论本研究证实错义突变c.281G＞A（p.R94H）和c.275 A＞G（p.N92S）是引起中国汉族人多发性脂囊瘤两家系临床症状的致病性突变,而不是正常多态性,为将来该家系的遗传咨询、产前诊断及基因治疗打下了基础。

论文目录

• 目录
• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 1.前言
• 2.实验材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 实验试剂
• 2.2.1 病理检查所需试剂
• 2.2.2 DNA提取试剂
• 2.2.3 PCR反应、电泳试剂
• 2.2.4 PCR产物纯化和测序试剂
• 2.3 实验仪器
• 2.3.1 临床资料获取和组织病理检查器材
• 2.3.2 DNA提取器材
• 2.3.3 PCR反应、产物纯化和电泳的器材
• 2.3.4 PCR产物测序仪器
• 2.4 分析软件和电子数据库查询信息
• 2.5 实验方法
• 2.5.1 皮肤标本组织病理制备
• 2.5.2 全血标本采集
• 2.5.3 基因组DNA提取
• 2.5.4 KRT17基因的引物设计
• 2.5.4.1 基因的序列获取
• 2.5.4.2 基因的Human Blast Search
• 2.5.4.3 结合文献并用Prime 5.0进行引物设计
• 2.5.4.4 引物稀释与保存
• 2.5.5 PCR反应
• 2.5.5.1 原理
• 2.5.5.2 PCR反应体系
• 2.5.5.3 PCR反应程序
• 2.5.5.4 PCR产物的保存
• 2.5.5.5 PCR反应的注意事项
• 2.5.6 PCR产物琼脂糖凝胶电泳
• 2.5.7 PCR产物纯化
• 2.5.8 对PCR片断进行测序
• 2.5.9 测序结果分析
• 3.结果
• 3.1 多发性脂囊瘤的临床与遗传特点分析
• 3.1.1 家系1
• 3.1.1.1 家系图
• 3.1.1.2 先证者调查
• 3.1.1.3 家系调查
• 3.1.2 家系2
• 3.1.2.1 家系图
• 3.1.2.2 先证者调查
• 3.1.2.3 家系调查
• 3.1.3 家系遗传特点分析
• 3.2 DNA测序结果
• 3.3 基因型与表型相关分析
• 4.讨论
• 5.结论
• 6.参考文献
• 附录
• 基本情况
• 个人简历
• 研究生期间所获奖励
• 读研期间参加的学术会议
• 参加的科研项目
• 读研期间撰写的论文
• 致谢
• 课题综述
• 多发性脂囊瘤的研究新进展