大豆糖蜜中功能成分的分离纯化

论文摘要

本文研究了大豆糖蜜提取低聚糖后的副产物中大豆磷脂,大豆皂苷和大豆异黄酮的分离纯化。首先对大豆糖蜜及预处理之后各组分进行了成分分析。对酸沉沉淀通过乙醇-正己烷萃取得到浓缩磷脂;研究了过氧化氢处理对浓缩磷脂脱色效果的影响;采用丙酮萃取的方法制备粉末磷脂,并对粉末磷脂进行了纯化研究。根据磷含量及回收率选择的乙醇-正己烷的最适比例为1:1。通过单因素实验讨论了粉末磷脂的制备条件,通过测定各步产品的得率,含磷量确定的丙酮处理最佳溶剂比为8:1,搅拌时间为30 min,萃取次数为3次;通过单因素实验确定浓缩磷脂的脱色条件,根据磷脂的色泽及酸价确定的过氧化氢脱色的最佳条件为过氧化氢用量为4%,脱色温度为60℃,脱色时间为50 min。采用柱层析的方法对脱色后的大豆粉末磷脂进行纯化,并对其进行了HPLC分析。接着研究了乙醇-正己烷萃取之后乙醇相的主要功能成分及其中皂苷的纯化。采用HPLC-MS分析确定了乙醇相的组成成分包括4种大豆异黄酮:daidzin,genistin,glycitin,6’’-O-acetyl-genistin及8种大豆皂苷:大豆皂苷Ba,Bb,Bc,A2,A4,Ea,Ab,Af。采用AB-8型大孔吸附树脂纯化大豆皂苷。通过静态实验确定的AB-8型大孔吸附树脂的分离的pH值为pH3.0,通过动态实验确定的AB-8型大孔吸附树脂对大豆皂苷的最佳柱分离条件为:室温下,首先用50%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱3BV,然后用95%的乙醇按相同的流速洗脱4BV,收集95%乙醇洗脱液。对95%乙醇洗脱液进行浓缩、正丁醇萃取及石油醚重结晶即可得到纯度为98.46%的大豆皂苷产品,通过HPLC-MS对其进行成分分析可知:产品主要成分为4种大豆皂苷,大豆皂苷Bb,Bc,Ab,Af。最后对酸沉处理之后得到的上清液通过AB-8型大孔吸附树脂后的50%乙醇洗脱液进行了异黄酮的分离纯化处理。采用氢氧化钙絮凝处理,酸水解,乙酸乙酯萃取及柱层析分离对大豆异黄酮进行了纯化。根据异黄酮的纯度及得率确定的氢氧化钙的絮凝pH为pH9.0;盐酸水解条件为:水解温度98℃,盐酸浓度2mol·L-1,水解时间为2h;树脂柱分离条件为:H103型大孔吸附树脂,收集乙醇浓度为75%-95%的洗脱液,对其进行分析可知:产品纯度为73.85%,其主要成分为3种大豆异黄酮苷元,其中daidzein的含量为45.03%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 大豆糖蜜简介
• 1.1.1 大豆糖蜜的制备及主要成分
• 1.1.2 大豆糖蜜的研究现状
• 1.2 大豆磷脂简介
• 1.2.1 大豆磷脂的组成成分
• 1.2.2 大豆磷脂的理化性质
• 1.2.3 大豆磷脂的生理功能及应用
• 1.2.4 大豆磷脂的制备方法
• 1.3 大豆皂苷简介
• 1.3.1 大豆皂苷的结构、来源和组成
• 1.3.2 大豆皂苷的理化性质
• 1.3.3 大豆皂苷的生理功能及应用
• 1.3.4 大豆皂苷的制备方法
• 1.3.5 大豆皂苷的测定方法
• 1.4 大豆异黄酮简介
• 1.4.1 大豆异黄酮的来源及组成成分
• 1.4.2 大豆异黄酮的理化性质
• 1.4.3 大豆异黄酮的功能及应用
• 1.4.4 大豆异黄酮的制备方法
• 1.4.5 大豆异黄酮的含量测定
• 1.5 立题依据及意义
• 第二章 大豆糖蜜中磷脂的分离纯化
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 主要实验仪器
• 2.2.2 实验材料与试剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 大豆糖蜜及副产物A 主要成分分析
• 2.3.2 分离纯化步骤
• 2.3.3 浓缩磷脂的制备
• 2.3.4 浓缩磷脂的脱色
• 2.3.5 粉末磷脂的制备
• 2.3.6 红外光谱分析
• 2.3.7 大豆磷脂的纯化
• 2.3.8 磷脂纯度的测定
• 2.3.9 回收率的计算
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 大豆糖蜜及副产物A 主要成分分析
• 2.4.2 浓缩磷脂的制备
• 2.4.3 浓缩磷脂的脱色
• 2.4.4 粉末磷脂的制备
• 2.4.5 粉末磷脂的分析
• 2.4.6 柱层析法纯化磷脂酰胆碱
• 2.5 本章小结
• 第三章 大豆糖蜜中皂苷的分离纯化
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 主要实验仪器
• 3.2.2 实验材料与试剂
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 树脂的预处理
• 3.3.2 成分及相关参数的测定
• 3.3.3 分离纯化步骤
• 3.3.4 组分C 的主要成分分析
• 3.3.5 AB-8 型大孔吸附树脂静态吸附实验
• 3.3.6 大豆皂苷的AB-8 型大孔吸附树脂柱分离
• 3.3.7 大豆皂苷的正丁醇萃取
• 3.3.8 粉末大豆皂苷产品的制备
• 3.3.9 回收率的计算
• 3.4 实验结果
• 3.4.1 组分C 主要成分分析
• 3.4.2 AB-8 型大孔吸附树脂静态吸附实验
• 3.4.3 组分C 酸沉后各组分的主要成分分析
• 3.4.4 AB-8 型大孔吸附树脂动态实验
• 3.4.5 大豆皂苷产品回收率分析
• 3.4.6 大豆皂苷产品的成分分析
• 3.5 本章小结
• 第四章 大豆糖蜜中异黄酮的分离纯化
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 主要实验仪器
• 4.2.2 主要实验材料
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 成分及相关参数的确定
• 4.3.2 树脂预处理
• 4.3.3 AB-8 型大孔吸附树脂处理量的确定
• 4.3.4 AB-8 型大孔吸附树脂上的异黄酮洗脱条件的确定
• 4.3.5 分离纯化步骤
• 4.3.6 氢氧化钙絮凝处理
• 4.3.7 酸水解前后柱层析效果的比较
• 4.3.8 酸水解处理
• 4.3.9 乙酸乙酯萃取
• 4.3.10 柱层析分离
• 4.3.11 回收率的计算
• 4.4 实验结果
• 4.4.1 AB-8 型大孔吸附树脂处理量的确定
• 4.4.2 AB-8 型大孔吸附树脂上的异黄酮洗脱条件的确定
• 4.4.3 副产物B 的成分分析
• 4.4.4 氢氧化钙絮凝pH 的确定
• 4.4.5 酸水解前后柱层析效果的比较
• 4.4.6 盐酸水解条件的确定
• 4.4.7 柱层析条件的确定
• 4.4.8 大豆异黄酮的回收率分析
• 4.4.9 实验所得大豆异黄酮的成分分析
• 4.5 本章小结
• 主要结论
• 展望
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的论文
• 附录