导读:本文包含了金属硫蛋白抗体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:近江牡蛎,金属硫蛋白(MT),原核表达,蛋白纯化
金属硫蛋白抗体论文文献综述
麦杰晖,于波,张其中[1]（2015）在《近江牡蛎金属硫蛋白(MT)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备》一文中研究指出双壳贝类金属硫蛋白(metallothionein,MT)可作为指示重金属污染的生物标志物,为了进一步研究MT作为重金属污染指示分子特点及其他生物学功能,需要抗MT的特异抗体。本研究构建了双壳贝类近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)金属硫蛋白重组表达质粒p GEX-4T-1/MT,将其转化到大肠杆菌(Escherichia coli)菌株M15中诱导表达,优化诱导条件后,在20℃、0.2 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导16 h后产生大量可溶的谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase(GST)-tagged MT,GST-MT)融合蛋白。12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析结果表明,成功获得了重组表达蛋白GST-MT。采用谷胱甘肽琼脂糖树脂(glutathione sepharose 4B)纯化该融合蛋白,于25℃凝血酶原位酶切16 h获得了重组MT,其分子量为9 k D。用纯化的重组MT免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus),获得效价大于1∶128 000的抗近江牡蛎MT的多克隆抗血清,该抗体能与近江牡蛎组织中的MT分子特异结合,实现了近江牡蛎MT的原核高效表达和多抗制备。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2015年08期）
何永吉,刘进平,王兰[2]（2014）在《河南华溪蟹金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出目的制备小鼠抗河南华溪蟹金属硫蛋白(MT)单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法分别利用小泛素样修饰蛋白(SUMO)融合表达系统和碱性磷酸酶(phoA)分泌表达载体制备河南华溪蟹重组蛋白SUMO-MT和His-MT,以SUMO-MT为免疫抗原、His-MT为检测抗原,利用杂交瘤技术建立抗河南华溪蟹MT mAb杂交瘤细胞株。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Western blot法、Dot-ELISA分析mAb的特异性。结果成功建立了2株稳定分泌抗MT蛋白的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为mAb-MT2和mAb-MT3,均属于IgG1亚类。腹水效价分别为1∶500 000、1∶1000 000,Western blot和Dot-ELISA结果证实2株mAb均能特异性识别重组MT和内源性MT。结论成功制备了具有较高特异性的河南华溪蟹MT mAb。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2014年08期）
吴晓萍,廖爱琳,章超桦,廖艳,卢虹玉[3]（2011）在《企鹅珍珠贝镉金属硫蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出镉—金属硫蛋白(Cd-MT)是水生环境中重金属镉污染的重要生物标志物,对该蛋白的研究不仅有利于Cd-MT免疫学检测方法的建立,也为水生环境重金属污染监测技术的开发提供理论依据。采用不同浓度CdCl2(0～0.8 mg/L)胁迫诱导企鹅珍珠贝合成Cd-MT,通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Sephadex G-50凝胶柱层析等方法从企鹅珍珠贝全脏器中纯化得到Cd-MT。紫外吸收显示,在CdCl2浓度为0.8 mg/L时,MT粗提液中的Cd-MT特征吸收最大,表明贝体内的Cd-MT含量随着CdCl2胁迫浓度的增大而增加。SDS-PAGE显示纯化后的Cd-MT及其二聚体分子量约为9 ku和18 ku。采用戊二醛法将获得的Cd-MT与牛血清白蛋白(BSA)偶联后免疫家兔,制备了兔抗企鹅珍珠贝Cd-MT多克隆抗血清。通过间接ELISA法检测其抗血清效价为1∶12 800。经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A50亲和层析纯化得到分子量约为35 ku的高纯度免疫球蛋白G(IgG)。ELISA免疫鉴定显示,该IgG不仅能识别企鹅珍珠贝的Cd-MT,还与马氏珠母贝的Cd-MT有明显的免疫交叉反应。(本文来源于《水产学报》期刊2011年06期）
王娟,王桂萍,张红生,夏妍,沈振国[4]（2010）在《海州香薷金属硫蛋白(EhMT1)的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为研究耐铜植物海州香薷的金属硫蛋白(EhMT1)的结构与功能,运用分子生物学方法构建了pGEX-2T-EhMT1重组表达载体,经转化大肠杆菌BL21(DE3)后表达得到大小为33×103左右的融合蛋白GST-EhMT1,与预期结果一致。对融合蛋白诱导表达的温度、时间、IPTG诱导浓度等条件进行了优化,成功构建了能大量表达可溶性GST-EhMT1的优良原核表达体系。诱导表达的融合蛋白经GST-Sepharose亲和层析纯化后,每升菌液获得的可溶性融合蛋白高达70mg。用纯化的融合蛋白免疫新西兰雄兔,制备的抗血清经间接ELISA检测到较高的多克隆抗体效价。蛋白质印迹结果显示,纯化的蛋白质与兔抗血清可以特异性结合。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2010年04期）
黄明立,张海英,李卫华[5]（2010）在《正常人血浆中抗金属硫蛋白抗体水平的初步调查》一文中研究指出当前,我国已进入了工业现代化时代,工业发展迅速,金属、合金在工业上被广泛应用,诸如在建筑、机械制造、电子、开采、冶金以及油漆、涂料等方面的使用,都会对生产环境产生不同程度的污染,从而对人的健康造成潜在的危害。很多金属、类金属如汞、镉、铅、铜、铝、锌、甲基汞等都容易导致肾脏及(本文来源于《吉林医学》期刊2010年15期）
王娟[6]（2009）在《海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出金属硫蛋白(MT)是一类分子量较小、富含Cys的金属结合蛋白,广泛分布于生物界。近年来研究表明,金属硫蛋白不仅参与体内微量元素的储存、转运和代谢,还具有拮抗电离辐射,清除自由基以及重金属解毒等作用。而植物金属硫蛋白的发现相对较晚,研究表明,植物金属硫蛋白可以通过其大量的Cys残基螯合重金属并清除活性氧,使植物免受氧化损伤。它还参与了植物的发育、胚胎发生、抵抗逆境胁迫等多种生理过程,因此对植物的生长非常重要。本研究旨在建立海州香薷金属硫蛋白的高效表达及纯化体系,制备其多克隆抗体。根据已克隆的海州香薷金属硫蛋白基因序列,设计并合成一对特异性PCR引物。以基因cDNA第一链为模板,通过PCR扩增获得MT基因,并进一步将之克隆在质粒载体pGEM-T easy上。用限制性内切核酸酶从该载体上切下目的基因,然后插入到表达载体pGEX-2T上获得重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG进行诱导表达,得到分子量约为33kDa的GST-EhMT1融合蛋白。该融合蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。可溶性蛋白经GST亲和树脂纯化后得到高纯度的目的蛋白。以融合蛋白作为抗原免疫家兔制备得到多克隆抗体。本实验取得如下研究结果：1.成功地将扩增得到的目的基因EhMT1与克隆载体pGEM-T easy连接并转化到宿主菌JM109中,构建了重组克隆载体pGEM-T-EhMT1。2.构建了EhMT1的原核表达载体pGEX-2T-EhMT1。序列分析表明,目的基因按正确的阅读框架插入到表达载体GST序列中。筛选出阳性重组体,表达的蛋白产物经SDS-PAGE证明EhMT1基因在大肠杆菌中成功得到了表达,其分子量约为33kDa.3.经过优化目的融合蛋白的表达条件后,得到了含量比较高的可溶性融合蛋白。该可溶性融合蛋白纯化后得到单一的目的融合蛋白条带。4.以目的融合蛋白作为抗原免疫成年家兔,获得多克隆抗体。间接ELISA和Western blotting分析表明,我们获得了高滴定度且特异性良好的多克隆抗体。该多克隆抗体的获得为目的基因进一步的功能验证、植物转基因检测等研究提供了依据。(本文来源于《南京农业大学》期刊2009-06-01）
李慧祺[7]（2009）在《环境镉接触人群中金属硫蛋白抗体对镉致肾损伤的影响》一文中研究指出镉(Cadmium,Cd)是有毒金属,可引起多器官损伤,长期低剂量接触下,肾脏是镉的靶器官(target organ)。在接触重金属化学物如汞、铅、镉、锌等后,机体会迅速启动一类金属特异的应答反应,其特征为合成一类小分子量环境应激蛋白(stress protein),以保护机体免受外源性化学物的损伤。这一类应激蛋白即金属硫蛋白(metallothionein,MT)。大量研究表明MT与镉在体内的运输、代谢和解毒等密切相关。人们处于生活和生产环境之中,容易受到多种环境因素的刺激,一方面,外源性抗原作用或环境有害因子刺激可诱导机体产生针对自身抗原的自身抗体;另一方面,机体内也存在多种天然自身抗体,也可能对环境因素的效应产生修饰作用。有研究发现人体外周血中含有抗MT的自身抗体,即金属硫蛋白抗体(metallothionein antibody,MT-Ab)。本课题组Chen等发现,MT-Ab高滴度人群较低滴度人群更易出现。肾小管功能损伤,然而其机制尚不清楚,MT-Ab水平与环境镉接触所致肾损伤之间的关系也尚不明确。为了寻找MT-Ab检测的至适条件以及探讨MT-Ab在镉致肾损伤的过程中的作用机制,我们进行了方法学的研究。将血浆样品分为MT预处理和无MT预处理两组,分别进行MT-Ab测定。结果发现,不论是大鼠血浆样品或者人血浆样品,MT预处理组和无MT预处理组的光密度值差异没有统计学意义(P＜0.05)。由此说明MT-Ab的不同存在形式对检测结果没有明显影响。在对镉、锌与MT-Ab对MT的竞争结合情况进行实验研究中,根据不同的金属离子处理分组,每个组内包含0、5、10、20、40 mg/mL 5个不同实验剂量组。采用竞争ELISA法,通过波长在490nm处的光密度值判断竞争结合的程度。从结果可见,实验所用包被MT浓度为1μg/mL,MT-Ab浓度为32U。随着镉、锌离子浓度剂量增加,光密度值下降。镉、锌与MT-Ab对MT的结合存在着竞争作用。环境镉接触人群研究发现,不同接触水平之间UCd、BCd、UB2M、UMT水平差异有统计学意义,随着环境镉接触水平增加,UNAG、UB2M、UMT含量和异常发生率明显增加。在不同接触水平下,MT-Ab水平没有明显差异。MT-Ab水平并不随着接触剂量增加而增加,与血镉、尿镉、总镉摄入量之间无明显联系(P＞0.05)。MT-Ab与UNAG和UB2M呈正相关,相关系数分别为0.125和0.234(P＜0.05)。按照肾功能恢复情况分组,恢复组MT-Ab水平低于未恢复组。在α=0.1水平上差异有统计学意义(P=0.067)。上述结果显示,环境镉接触与肾功能损伤间存在剂量反应关系,而与血浆MT-Ab直接无明显关联。血浆MT-Ab高水平者更容易出现肾脏损伤,提示MT-Ab可以作为环境镉接触人群镉致肾功能损伤的易感性标志物。(本文来源于《复旦大学》期刊2009-05-15）
李慧祺,梁艺怀,雷立健,金泰廙[8]（2009）在《镉、锌与金属硫蛋白抗体对金属硫蛋白的竞争结合》一文中研究指出[目的]通过镉、锌与金属硫蛋白抗体(MT-Ab)对金属硫蛋白(MT)的竞争结合,探讨MT-Ab在镉致肾损伤过程中的作用机制。[方法]根据不同的实验处理分组,每组包含0、5、10、20、40mg/mL5个不同实验浓度亚组。采用竞争ELISA法,按波长490nm处的光密度值判断竞争结合的程度。[结果]实验所用包被MT质量浓度为1μg/mL,MT-Ab浓度为32U。随着实验镉、锌离子浓度增加,光密度值下降。[结论]镉、锌与MT-Ab对MT的结合存在着竞争作用,MT-Ab可使CdMT解离产生游离镉离子,从而导致肾损伤效应。(本文来源于《环境与职业医学》期刊2009年02期）
宋琦,李晓明[9]（2008）在《喉癌中金属硫蛋白、p53蛋白和ki-67抗体表达的预后意义》一文中研究指出Pastuszewski等研究金属硫蛋白(MT)在喉癌中的表达情况,并与ki-67抗原和p53蛋白相联系,选择临床和病理变量,分析其可能影响预后的意义。作者回顾性分析了65例喉癌患者,使用免(本文来源于《中国医学文摘(耳鼻咽喉科学)》期刊2008年06期）
王廷璞,安建平,邹亚丽,马腾,张春成[10]（2008）在《镉诱导黄瓜金属硫蛋白抗体的制备及纯化》一文中研究指出用镉诱导黄瓜叶片组织产生金属硫蛋白(MT),经分离纯化,血清白蛋白偶联后作为抗原。采用背部皮内、皮下和耳缘静脉注射免疫家兔,制备出效价为1:16的免疫血清。用饱和硫酸铵盐析法和Sephadex G-200柱层析分离纯化IgG。经测定纯化后的IgG蛋白含量为0.9364mg·ml-1。用纯化的IgG建立黄瓜Cd-MT的斑点免疫试验检测方法可检测黄瓜Cd-MT的最低含量为200pg·ml-1。(本文来源于《生态学杂志》期刊2008年09期）
金属硫蛋白抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的制备小鼠抗河南华溪蟹金属硫蛋白(MT)单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法分别利用小泛素样修饰蛋白(SUMO)融合表达系统和碱性磷酸酶(phoA)分泌表达载体制备河南华溪蟹重组蛋白SUMO-MT和His-MT,以SUMO-MT为免疫抗原、His-MT为检测抗原,利用杂交瘤技术建立抗河南华溪蟹MT mAb杂交瘤细胞株。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Western blot法、Dot-ELISA分析mAb的特异性。结果成功建立了2株稳定分泌抗MT蛋白的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为mAb-MT2和mAb-MT3,均属于IgG1亚类。腹水效价分别为1∶500 000、1∶1000 000,Western blot和Dot-ELISA结果证实2株mAb均能特异性识别重组MT和内源性MT。结论成功制备了具有较高特异性的河南华溪蟹MT mAb。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
金属硫蛋白抗体论文参考文献
[1].麦杰晖,于波,张其中.近江牡蛎金属硫蛋白(MT)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备[J].农业生物技术学报.2015
[2].何永吉,刘进平,王兰.河南华溪蟹金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志.2014
[3].吴晓萍,廖爱琳,章超桦,廖艳,卢虹玉.企鹅珍珠贝镉金属硫蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备[J].水产学报.2011
[4].王娟,王桂萍,张红生,夏妍,沈振国.海州香薷金属硫蛋白(EhMT1)的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备[J].南京农业大学学报.2010
[5].黄明立,张海英,李卫华.正常人血浆中抗金属硫蛋白抗体水平的初步调查[J].吉林医学.2010
[6].王娟.海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备[D].南京农业大学.2009
[7].李慧祺.环境镉接触人群中金属硫蛋白抗体对镉致肾损伤的影响[D].复旦大学.2009
[8].李慧祺,梁艺怀,雷立健,金泰廙.镉、锌与金属硫蛋白抗体对金属硫蛋白的竞争结合[J].环境与职业医学.2009
[9].宋琦,李晓明.喉癌中金属硫蛋白、p53蛋白和ki-67抗体表达的预后意义[J].中国医学文摘(耳鼻咽喉科学).2008
[10].王廷璞,安建平,邹亚丽,马腾,张春成.镉诱导黄瓜金属硫蛋白抗体的制备及纯化[J].生态学杂志.2008