贾第虫病毒转染载体的构建及绿色荧光蛋白在贾第虫体内的表达

论文题目: 贾第虫病毒转染载体的构建及绿色荧光蛋白在贾第虫体内的表达

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 刘全

导师: 张西臣

关键词: 贾第虫,贾第虫病毒

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究以中国人源贾第虫病毒（GLV）基因组为基础,构建GLV与GFP的嵌合体,优化GLV表达外源基因的顺式作用元件;克隆贾第虫GDH启动子并对其转录活性进行了鉴定;构建NEO抗性盒pGDH5/NEO/GDH3并转染贾第虫,通过G418筛选获得抗性虫株;以G418为筛选标记,构建贾第虫DNA稳定转染载体,建立DNA稳定转染方法;首次将GLV高效表达外源基因的顺式作用元件置于GDH启动子下游,构建GLV转录盒,将GLV转录盒与NEO抗性盒串联获得GLV载体pGLV,线性化pGLV后电穿孔转染贾第虫北京株,通过G418筛选建立了抗性虫株,经核酸检测发现线性质粒pGLV已整合入贾第虫基因组,而GLV和GFP的嵌合体则以双链RNA的形式存在;遗传稳定性分析表明该抗性虫株具有较好的遗传稳定性;并且证实GFP在贾第虫体内得到了表达,并且主要以分泌蛋白的形式表达,表达GFP能与兔抗GFP血清发生反应;经（NH4）2SO4沉淀、凝胶过滤层析柱纯化后其纯度达85.3%,蛋白质浓度测定表明在培养上清中目的蛋白含量为0.56g/L。该表达系统具有表达量高、表达产物易于纯化的特点,从而为外源基因在真核细胞中的表达提供了新的方法。

论文目录:

前言

第一篇 文献综述

第一章 贾第虫分子生物学研究进展

1 贾第虫基因转染研究

2 贾第虫表面抗原研究

第二章 贾第虫病毒研究进展

1 GLV生物学特征

2 GLV基因组结构与功能

3 GLV基因组编码产物

4 GLV载体

5 结语

第三章 RNA病毒反向遗传学操作技术研究进展

1 RNA病毒反问遗传操作系统

2 正链RNA病毒反向遗传系统

3 负链RNA病毒反向遗传系统

4 双链RNA病毒反向遗传系统

5 结语

第二篇 研究内容

第一章 GLV介导外源基因的表达

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二章 贾第虫谷氨酸脱氢酶启动子的克隆及转录活性鉴定

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 贾第虫G418抗性虫株的建立及鉴定

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第四章 贾第虫DNA稳定转染方法的建立

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第五章 GLV载体的构建及外源基因的表达

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

中文详细摘要

英文摘要

攻博期间发表的学术论文及其他成果

致谢

导师及作者简介

发布时间: 2005-08-26

参考文献

• [1].TLRs介导的天然免疫应答在贾第虫致病中的作用及机制[D]. 李新.吉林大学2018

相关论文

• [1].犬贾第虫不同虫株及发育阶段的比较蛋白质组学研究[D]. 李凌丹.吉林大学2012
• [2].柔嫩艾美耳球虫端粒DNA和TERT基因克隆及端粒酶活性测定[D]. 杨桂连.吉林大学2009
• [3].隐孢子虫核酸疫苗的研究[D]. 何宏轩.中国人民解放军军需大学2002
• [4].中国蓝氏贾第虫病毒的鉴定、全长cDNA构建及部分衣壳蛋白表达[D]. 田宗成.中国人民解放军军需大学2003
• [5].弓形虫ROP2基因在大肠杆菌和卡介苗中的表达及免疫原性的研究[D]. 王洪法.吉林大学2005
• [6].鸡柔嫩艾美耳球虫杂交株F3的培育及微线相关基因研究[D]. 魏峰.吉林大学2005
• [7].微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因的筛选、表达及免疫保护性研究[D]. 姚龙泉.吉林大学2006
• [8].犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因表达抑制效果研究[D]. 陈丽凤.吉林大学2006
• [9].牛源环孢子虫与贾第虫的分子特性与检测研究[D]. 肖淑敏.华南农业大学2006
• [10].病毒载体介导的微型核酶对犬贾第虫端粒酶活性的影响[D]. 刘成武.吉林大学2008

标签：贾第虫论文;  贾第虫病毒论文;