PP2C蛋白磷酸酯酶在酵母细胞耐盐和碳源利用方面的功能

论文摘要

本实验室前期工作中发现,酿酒酵母磷酸酯酶PTC1基因与PTC6基因的缺失导致细胞对免疫抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,缩写为Rap)的高度敏感性[1]。为进一步研究PTC1和PTC6基因间是否存在遗传互作,我们在非发酵碳源,高浓度盐(NaCl,KCl,LiCl)等条件下测定了单基因和双基因缺失株的生长表型。研究结果显示在雷帕霉素或氯化锂的条件下,ptc6Δ缺失株的表型可以被PTC1基因的缺失所抑制。同时,在ptc6Δ缺失株中高表达PTC1基因能够增加PTC6基因缺失株对雷帕霉素的耐受性。另外,我们发现在非发酵碳源、潮霉素以及高盐条件下,PTC5、PTC7与PTC1基因之间不存在遗传互作。在雷帕霉素条件下,PTC5、PTC7与PTC1基因之间存在一定的遗传互作。在雷帕霉素,LiCl, NaCl和KCl条件下,PTC5基因与PTC6基因间也无遗传互作。但是,PTC7基因缺失则能够抑制ptc6Δ缺失株对雷帕霉素的敏感表型,表明两者之间存在遗传互作。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章.前言
• 1.1 研究酵母基因功能的意义
• 1.1.1 酵母基因组组成
• 1.1.2 酵母基因组分析
• 1.1.3 酵母作为模型生物的作用
• 1.2 MAPK 级联系统
• 1.3 HOG 途径
• 1.4 PP2C 蛋白磷酸酯酶
• 1.5 雷帕霉素
• 1.6 潮霉素B
• 1.7 此课题的研究意义
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 质粒
• 2.1.3 引物
• 2.1.4 主要实验仪器
• 2.1.5 试剂
• 2.1.6 分子克隆所用的工具酶
• 2.1.7 培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 大肠杆菌和酵母菌的培养及菌种保藏
• 2.2.2 CaC12法制备感受态细胞
• 2.2.3 质粒转化E.coli 感受态细胞
• 2.2.4 SDS 碱裂解法小量制备细菌中的质粒DNA
• 2.2.5 SDS 碱裂解法中量制备细菌中的质粒DNA
• 2.2.6 玻璃珠法提取酵母基因组DNA
• 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.8 PCR 扩增DNA 片段
• 2.2.9 乙醇沉淀法纯化DNA 片段
• 2.2.10 DNA 片段的柱纯化
• 2.2.11 酶切
• 2.2.12 DNA 连接
• 2.2.13 乙酸锂法转化酿酒酵母细胞
• 2.2.14 倍比稀释法
• 2.2.15 基因同源重组进行酵母基因缺失株的标记替换
• 2.2.16 基因敲除
• 2.2.17 网络共享资源简介
• 第三章 实验结果与讨论
• 3.1 PTC5、PTC7 和PTC1 基因的遗传互作
• 3.2 PTC5、PTC6 和PTC7 基因的遗传互作
• 3.3 PTC1 与PTC6 基因的遗传互作
• 3.3.1 单倍体酿酒酵母PTC1 和PTC6 双基因缺失株的构建
• 3.3.2 酿酒酵母PTC1 和PTC6 基因缺失株的表型研究
• 3.3.3 酿酒酵母PTC1 基因对ptc6Δ缺失株的功能互补研究
• 3.3.4 酿酒酵母PTC6 基因对ptc1Δ缺失株的功能互补研究
• 3.4 酿酒酵母PTC2、PTC3、PTC4 与PTC7 基因的遗传互作研究
• 第四章 论文总结
• 参考文献
• 发表论文和科研情况说明
• 致谢
• 附录1 KanMX DNA 序列图
• 附录2 中英文词汇对照表