Aurora-A高表达抑制Cyclin B1泛素化降解诱导其表达上调及在肿瘤发生发展中的作用

论文摘要

细胞周期的顺利进行对于维持基因组稳定性至关重要,细胞周期的异常,将导致基因组不稳定性,最终可能导致肿瘤发生。真核细胞的细胞周期受多种调节蛋白调控,这些调节因子的表达和调控异常将导致细胞周期的异常,从而诱发基因组不稳定性和肿瘤形成。Aurora-A和Cyclin B1是两个重要的细胞周期调控蛋白,它们在有丝分裂调控过程中发挥重要作用。Cyclin B1是细胞周期依赖性蛋白激酶CDK1的调节亚基,它通过调节CDK1活性参与有丝分裂调控。Aurora-A是一种中心体相关蛋白激酶,其主要功能是参与中心体成熟和分离、以及双极纺锤体结构的形成。目前已经发现Aurora-A在多种人类肿瘤中存在高表达,Aurora-A高表达诱导细胞出现肿瘤表型,提示Aurora-A可能作为一种潜在的癌基因起作用,但目前关于Aurora-A参与肿瘤发生发展的详细机制尚不清楚。我们的研究发现,Aurora-A高表达诱导Cyclin B1的表达上调,这种表达上调不是细胞周期分布改变所致;Aurora-A高表达不影响Cyclin B1的转录水平。进一步研究表明,Aurora-A高表达延迟Cyclin B1降解;Aurora-A高表达的细胞中Cyclin B1的泛素化水平降低,Cyclin B1与参与其降解的多种蛋白的结合减弱;Aurora-A和Cyclin B1之间存在体内、体外相互作用。另外,免疫组化分析发现,Aurora-A和Cyclin B1在食管癌中均存在高表达,阳性表达率分别为68.8%和71.7%,更重要的是,Aurora-A和Cyclin B1在食管癌中具有显著的表达相关性。以上结果表明异常高表达的Aurora-A可能通过与Cyclin B1的相互作用抑制其泛素化降解,提高其蛋白稳定性,导致有丝分裂异常、基因组不稳定性,最终导致肿瘤发生发展。

论文目录

摘要

ABSTRACT

前言

1.Aurora-A

2.Cyclin B1

3.蛋白质泛素化降解

4.小结

技术路线

实验材料

1.菌种、质粒及细胞株

2.食管癌临床组织标本

3.主要试剂

4.引物

5.重要试剂的配制

6.生物信息学分析软件

7.仪器设备

实验方法

1.细胞培养和冻存

2.细菌培养

3.质粒DNA的制备及纯化

4.质粒DNA的浓度测定及纯度鉴定

5.在KYSE150细胞中转染pEGFP-C1

6.提取细胞总RNA

7.RNA浓度测定

8.逆转录

9.PCR

10.Western-blot

11.流式细胞仪检测细胞周期

12.细胞周期同步化

13.蛋白稳定性实验

14.免疫组化

15.细胞免疫荧光

16.GsT融合蛋白沉降技术

17.免疫共沉淀

18.数据的获取及统计学分析

实验结果

1.细胞系培养、鉴定

2.Aurora-A可能调节的下游靶蛋白筛选

3.Aurora-A高表达对食管癌细胞周期分布的影响

4.Auorra-A高表达对Cyclin B1 mRNA水平的影响

5.Aurora-A高表达抑制Cyclin B1降解,提高其稳定性

6.Aurora-A高表达抑制Cyclin B1泛素化

7.Auorra-A与Cyciln B1存在体外相互作用

8.Aurora-A与Cyelin B1存在体内相互作用

9.Aurora-A高表达与Cylin B1的亚细胞定位

10.食管癌组织中Aurora-A与Ccylin B1的表达相关性

讨论分析

一、结果讨论

二、分析Aurora-A参与肿瘤发生发展的可能机制

全文小结

参考文献

文献综述

缩写表

致谢

附录

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标签：细胞周期论文; 蛋白稳定性论文; 肿瘤形成论文;

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