“乳炎康注射液”制备及其初步药效学研究

论文摘要

奶牛乳房炎是奶牛的常见病和多发病之一,应用抗菌药物治疗乳房炎是国内外普遍采用的主要措施之一,但随着抗菌剂长期大剂量的广泛使用,细菌耐药性和抗生素乳中残留问题被普遍关注。有研究显示,一些化学试剂虽有逆转多重耐药的功效,但因其具有较大的毒副作用,使临床应用受到限制,开发中药多重耐药逆转剂有较好的前景。本试验对雅安地区的部分临床型奶牛乳房炎进行了调查,并对奶牛乳房炎的病原菌进行了分离、鉴定及药物敏感性测定等一系列试验,在此基础上,根据奶牛乳房炎辨证确定了清热解毒、疏肝解郁、消肿止痛的治疗原则选取常用六味中药,并结合中兽医基础理论和中药药剂学理论,确定了中药复方的最佳组成,将其制成中药复方“乳炎康注射液”,同时建立该注射液的质量检查标准,并进行了体外抑菌实验、联合β—内酰胺类抗生素的体外抑菌效应研究、奶牛乳房炎主要致病菌对β—内酰胺类耐药性的消除作用实验、对细菌体外作用机制的研究。结果表明:1从患临床型乳房炎的奶牛乳汁中,通过分离培养和生化鉴定,筛选出三种主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌),采用试管二倍稀释法,测定了“乳炎康注射液”对三种致病菌的最低抑菌浓度(MIC),分别为500mg/mL、250mg/mL、125mg/mL。2金黄色葡萄球菌,无乳链球菌,大肠杆菌对部分β—内酰胺类抗生素的耐药已相当严重,耐药率普遍较高,多重耐药也相当严重。通过中药感触培养的方法观察,“乳炎康注射液”对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌,无乳链球菌,大肠杆菌的耐药性有一定的消除作用。3采用棋盘稀释法,联合部分β—内酰胺类抗生素与“乳炎康注射液”对耐药的无乳链球菌和部分金黄色葡萄球菌具有协同作用,而对大肠杆菌仅有累加作用。4通过电镜实验观察,推断“乳炎康注射液”对细菌的体外抑菌是作用于细胞膜,使其受损,阻断了细菌的物质代谢;阻碍细菌胞壁的合成,导致菌体膨胀变性。5高效液相色谱(HPLC)检测“乳炎康注射液”中绿原酸的方法具有稳定、可靠、重现性、回收率高、结果准确等特点,可作为该制剂含量检测的方法。6“乳炎康注射液”在常温闭光保存的条件下,有效期为1.5年。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述及选题背景
• 1 文献综述
• 1.1 奶牛乳房炎的研究现状
• 1.2 中医药对奶牛乳房炎的预防与治疗研究概况
• 1.3 中药消除细菌耐药性的研究现状
• 1.3.1 细菌耐药机制
• 1.4 中药在细菌耐药性消除中的研究现状
• 1.4.1 中药用在质粒消除方面的研究
• 1.4.2 中药作为外排泵抑制剂的研究
• 1.4.3 中药被用作多药耐药抑制剂方面的研究
• 1.4.4 其他
• 2 选题背景
• 2.1 立题依据
• 2.2 研究内容
• 2.3 研究意义
• 第二部分 实验研究
• 第一章 雅安地区临床型奶牛乳房炎病原菌分离及鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 奶样采集
• 1.1.2 培养基及试剂
• 1.1.3 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 分离鉴定路线
• 1.2.2 细菌分离与培养
• 1.2.3 生化实验
• 1.2.4 动物致病性实验
• 2 结果
• 2.1 生化试验结果
• 2.1.1 触酶试验结果
• 2.1.2 血浆凝固酶试验结果
• 2.1.3 氧化酶试验结果
• 2.1.4 其它生化试验结果
• 2.2 分离培养结果
• 2.3 分离鉴定结果
• 2.4 动物试验结果
• 3 讨论
• 第二章 中药"乳炎康注射液"的制备及质量标准控制研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要实验药品与试剂
• 1.1.2 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 中药"乳炎康注射液"的制备工艺
• 1.2.3 "乳炎康注射液"含量测定方法的建立
• 2 结果
• 2.1 性状
• 2.2 检查
• 2.3 "乳炎康注射液"的定性鉴定结果
• 2.4 注射液中绿原酸的含量限定及稳定性试验结果
• 2.4.1 标准曲线的建立
• 2.4.2 精密度试验结果
• 2.4.3 重现性试验结果
• 2.4.4 加样回收率试验结果
• 2.4.4 注射液中绿原酸含量限定结果
• 2.4.5 绿原酸的稳定性试验结果
• 3 讨论
• 第三章 "乳炎康注射液"对奶牛乳房炎主要病原菌的体外抑菌实验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 菌种
• 1.1.2 药物
• 1.1.3 培养基
• 1.1.4 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 菌液制备
• 1.2.2 药液稀释
• 1.2.3 细菌接种和琼脂平皿培养
• 1.2.4 最小抑菌浓度的判定
• 2 结果
• 3 讨论
• 第四章 "乳炎康注射液"消除奶牛乳房炎主要致病菌对β—内酰胺类耐药性的作用研究实验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药品与试剂
• 1.1.2 菌种
• 1.1.3 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 药物敏感性实验
• 1.2.2 "乳炎康注射液"储备液的配制
• 1.2.3 耐药菌株的中药感触培养
• 1.2.4 耐药菌株中药感触培养后药敏试验
• 2 结果
• 2.1
• 2.2 与中药感触后抑菌圈直径的变化
• 2.3 "乳炎康注射液"感触作用后细菌敏感性的变化
• 3 讨论
• 第五章 "乳炎康注射液"与β—内酰胺类抗生素的体外联合抑菌效应研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药品与试剂
• 1.1.2 菌株
• 1.1.3 仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 菌液制备
• 1.2.2 抗菌药物的配制
• 1.2.3 "乳炎康注射液"最低抑菌浓度（MIC）的测定
• 1.2.4 最低抑菌浓度（MIC）的测定
• 1.2.5 体外联合药敏方法
• 1.2.6 联合药敏试验的结果判定
• 2 结果
• 3 讨论
• 第六章 中药"乳炎康注射液"对细菌体外作用机制的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药物
• 1.1.2 菌株
• 1.1.3 培养基
• 1.1.4 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 菌液制备
• 1.2.2 "乳炎康注射液"储备液的配制
• 1.2.3 电镜实验
• 2 透射电镜结果
• 2.1 金黄色葡萄球菌在电镜下的结构变化:
• 2.2 无乳链球菌在电镜下的结构变化:
• 2.3 大肠杆菌在电镜下的结构变化:
• 3 讨论
• 第三部分 结论与创新
• 1 结论
• 2 创新
• 参考文献:
• 致谢
• 攻读硕士期间文章发表目录