论文摘要
目前异基因造血干细胞移植（Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation,Allo-HSCT）是根治多种恶性血液病的唯一手段。但移植后的并发症,尤其是移植物抗宿主病（Graft Versus Host Disease,GVHD）仍然是影响移植疗效的重要因素,是目前移植领域亟待解决的课题。GVHD是由供者移植物中的T淋巴细胞识别宿主主要和次要组织相容性抗原引起的免疫反应。这些抗原由抗原递呈细胞（APC）呈递后,通过MHC-Ⅰ、Ⅱ分子结合于供者T细胞,从而激活T细胞,发生GVHD。在防治移植排斥的研究和临床实践中,强有力的免疫抑制剂及去除供者移植物中T淋巴细胞的策略最常采用。但是,大量免疫抑制剂的使用,除本身诸如肝肾毒性等毒副作用外,随用药时间的延长,免疫抑制剂所引起的严重的机会感染等矛盾日益突出。同样去除移植物中的T细胞虽然可以显著降低GVHD的发生率并可减轻其严重程度,但是移植物中由于缺乏T细胞,其增强免疫和移植物抗白血病（GVL）作用也显著降低。统计结果表明,用去除供者T细胞的骨髓移植治疗白血病,病人的复发率明显升高。实际上在移植物中导致GVHD发生的T细胞仅仅是T细胞中很少的一部分,是针对主要及次要组织相容性抗原特异性的Th1细胞,而与GVL相关的是Th2细胞。所以,最理想的方法是能够选择性地清除引起GVHD的淋巴细胞,同时保留具有GVL作用和其它功能的细胞。树突状细胞（Dendritic Cell,DC）是体内最重要的抗原提呈细胞（Antigen Presenting Cell,APC）,其免疫学功能具有两重性。在一定条件下,能处理提呈抗原,表达共刺激分子,分泌细胞因子,活化T淋巴细胞,产生免疫应答,但在另一些条件下却可使T细胞产生耐受,即介导免疫耐受。近来有应用腺病毒或逆转录病毒为载体,将具有诱导耐受作用的免疫抑制分子靶基因转染给供体DC并使其表达。已不断有实验证实,单独转导以上各靶基因可降低移植物排斥机率,延长器官植活时间。免疫球蛋白样转录物（Immunoglobulin-like Transcript,ILT）3和ILT4是表达于DC表面的抑制性受体,对于耐受性DC的形成起着非常重要的作用。研究发现,维生素D3或细胞因子（如IL-10,IFN-α等）能诱导未成熟DC转化为耐受性DC,而IL-10还可使ILT4表达增高,同时下调共刺激信号分子CD86等的表达。这些都说明ILT3、ILT4表达增加可能是耐受性DC的共同特征,高表达或强制性表达的ILT3、ILT4可诱导DC耐受,从而使机体产生免疫耐受。基于以上的研究,我们认为用ILT基因转染DC后,体外与供体造血干细胞移植物混合培养,有望能选择性清除引起GVHD反应的T淋巴细胞,而同时保留抗肿瘤、抗感染的淋巴细胞。第一部分:首先从大鼠骨髓中分离并诱导扩增DC进行功能鉴定,将重组腺病毒载体构建ILT转染DC并进一步检测转染后DC生物学特性,观察ILT基因转染对DC的影响。结果:基因转染后RT-PCR检测高表达ILT,表明腺病毒载体能有效的将ILT转染DC上;用流式细胞术对基因转染前后DC细胞表面的CD80、CD86、MHC-Ⅱ等表型进行分析,没有发现明显改变,这些说明ILT基因转染后没有改变DC原有的活性和基本功能,作为本目的基因的表达载体具有可使用性。第二部分:探讨ILT-DC对异基因T细胞的作用。通过MTT法检测异基因混合淋巴细胞增殖情况表明,经过ILT-DC与无病毒转染DC（对照组）相比显著抑制了淋巴细胞增殖。进一步用Annexin V/PI双检法检测ILT-DC与异基因反应性T细胞作用后T细胞的凋亡情况,结果发现ILT-DC有诱导同种异基因T细胞凋亡的作用。通过同种异基因体外反应模型,重组腺病毒载体构建ILT转染DC可通过使T细胞低反应性和细胞凋亡在移植中诱导一定程度的免疫耐受,移植经过这种处理的骨髓有望能够抑制GVHD的发生。
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标签：造血干细胞移植论文; 移植物抗宿主病论文; 树突状细胞论文; 免疫球蛋白样转录物论文;