药用植物中生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选

论文摘要

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种渐进性的、变性神经紊乱疾病,从而导致记忆和行为的损伤。对于AD的治疗,一种有希望的策略是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用。几种强效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,比如石杉碱甲和加蓝他敏,最初都是从草药中分离得到,这暗示我们,对于寻找潜在的乙酰胆碱酯酶抑制剂来说,药用植物是一个非常丰富的资源。在我们的研究中,为了寻找潜在的乙酰胆碱酯酶抑制剂,50种中草药的生物碱提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性通过艾尔曼比色法结合修饰的薄层色谱（TLC）生物自显法被评价。对于具有显著乙酰胆碱酯酶抑制活性的生物碱提取物,它们对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度也被测定。结果显示元胡、黄柏、钩藤、荷叶、两面针、马齿苋、伊贝母、平贝母、吴茱萸、半夏、猫爪草、板蓝根、附子与百部的生物碱提取物展示了显著的抗乙酰胆碱酯酶活性,这14种草药的生物碱提取物对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度（IC50）依次是1.93μg/mL, 4.9μg/mL,10.8μg/mL,12.2μg/mL,17.4μg/mL,29.4μg/mL,31.2μg/mL,50.6μg/mL, 50.7μg/mL,56.2μg/mL,59.5μg/mL,82.9μg/mL,88.8μg/mL和102.6μg/mL。其余植物的生物碱提取物没有显示或显示了非常弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性。在筛选结果的基础上,本文进一步分离了两面针生物碱提取物中的乙酰胆碱酯酶抑制剂,得到10个化合物。这10个化合物通过1HNMR、13CNMR、2D-NMR. EI-MS等现代波谱技术鉴定为：毛两面针素（1）,茵芋碱（2）,白藓碱（3）,崖椒碱（4）,magnolone（5）,加锡果亭（6）,合帕洛平（7）,（-）-（S）-加锡弥罗果碱（8）,5,6,7-三甲氧基香豆素（9）,Zanthodioline（10）.通过艾尔曼比色法结合修饰的薄层生物自显影法对10个化合物进行了活性评价,结果显示茵芋碱（LMZ-2）是两面针中抗乙酰胆碱酯酶活性的主要活性成分,其显示了中等活性的乙酰胆碱酯酶抑制作用,半数抑制浓度为33.3μmol/L,其余化合物没有显示或显示了弱的活性。研究的结果暗示我们,传统中草药中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂可以为开发治疗AD的新药提供有用的先导化合物,乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选策略也为其它类天然酶抑制剂的筛选提供了借鉴。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 立题依据
• 1.1.1 阿尔茨海默病的研究现状
• 1.1.2 植物中筛选天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的依据
• 1.1.3 筛选生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂的依据
• 1.1.4 小结
• 1.2 植物中天然乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选进展
• 1.2.1 生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.2 萜类乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.3 酚类乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.4 小结
• 1.3 植物中天然乙酰胆碱酯酶抑制剂检测方法进展
• 1.3.1 Ellman法评价乙酰胆碱酯酶抑制活性
• 1.3.2 TLC生物自显影法评价乙酰胆碱酯酶抑制活性
• 1.3.3 小结
• 1.4 课题来源
• 1.5 研究目的
• 1.6 研究内容
• 第二章 生物碱提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性的筛选
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 化学试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 植物总生物碱提取物的准备
• 2.2.2 备用溶液的配制
• 2.2.3 Ellman法评价植物总生物碱提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性
• 2.2.4 TLC生物自显影法评价植物总生物碱提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性
• 2.2.5 快蓝盐与1-萘酚之间的反应被阻断而引起的假阳性测试
• 2.2.6 结果
• 2.2.7 讨论
• 2.2.8 小结
• 第三章 两面针中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离与结构鉴定
• 3.1 两面针应用现状、化学成分及生物活性研究进展
• 3.1.1 两面针应用现状
• 3.1.2 两面针化学成分研究进展
• 3.1.3 两面针生物活性研究进展
• 3.1.4 小结
• 3.2 两面针中乙酰胆碱酯酶抑制剂的跟踪分离与结构鉴定
• 3.2.1 材料与仪器
• 3.2.2 试验方法
• 3.2.3 结果
• 3.2.4 讨论
• 3.2.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录
• 附录B 活性化合物—茵芋碱的图谱