鹅SCD1基因的遗传变异及其组织表达规律的研究

论文摘要

硬脂酰辅酶A去饱和酶（Stearoyl-CoA desaturase, SCD）1是合成单不饱和脂肪酸的限速酶,它主要催化饱和脂肪酸——硬脂酰辅酶A（C16：0）和棕榈酰辅酶A（C18：0）在第9和10碳原子间导入氢键,分别形成单不饱和脂肪酸——油酸（C16：1）和棕榈酸（C18：1）。本研究以原鸡SCD1基因序列为基础,设计引物扩增并克隆朗德鹅SCD1基因CDS序列；以扩增得到的朗德鹅SCD1基因的CDS序列为模板,设计多对覆盖全CDS序列的引物,对朗德鹅、狮头鹅、四川白鹅和豁眼鹅进行SNP分析；运用荧光定量PCR（qRT-PCR）技术,研究SCD1基因在朗德鹅各组织中的表达状况、对照组和填肥组之间的表达水平差异、不同填饲阶段的组织表达规律,以及禁食对其表达的影响。主要结果如下：1、克隆了朗德鹅SCD1基因的完整CDS序列,全长1083bp,包含6个外显子,编码360个氨基酸。预测其蛋白质分子量为40967.2Da,等电点为8.8,为亲水性蛋白,存在4个跨膜区域。预测其氨基酸二级结构存在Alpha螺旋、延长片段和无规卷曲三种结构。与人、小鼠、牛、原鸡和斑胸草雀的同源性为72%-92%。2、采用PCR-SSCP技术检测SCD1基因的多态性,在狮头鹅、四川白鹅和豁眼鹅的外显子3上（外显子3的50bp处）均发现了T/C碱基替换,产生了AA、AB和BB三种基因型,而朗德鹅此位点为野生型AA型,没有发生突变。3、朗德鹅外显子2上（外显子2的132bp处）发生了T/C碱基替换,导致产生AA、AB和BB三种基因型。三种基因型与产肝性能相关性不显著（P>0.05）。4、应用荧光定量PCR技术检测了SCD1基因在肝脏等12个组织的表达情况。SCD1基因在填肥组朗德鹅的肝脏和脂肪中的相对表达量较高达到1.0623和0.6448。其中,填肥组的肝脏、脂肪中SCD1基因的表达量是对照组的2倍。5、肝脏、脂肪、下丘脑和胸肌中SCDl基因表达量在填饲10d达到较高水平,填饲19d后表达有所降低。但总体而言,SCD1基因在填饲组的四个组织中表达量都增加。在对照组中,禁食24h后,四个组织中SCDl基因的表达量均急剧下降。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 1 文献综述
• 1.1 硬脂酰辅酶A去饱和酶的研究概况
• 1.1.1 硬脂酰辅酶A去饱和酶基因的结构与组织分布特点
• 1.1.2 硬脂酰辅酶A去饱和酶的功能
• 1.1.3 硬脂酰辅酶A去饱和酶基因的调节
• 1.1.4 硬脂酰辅酶A去饱和酶基因在畜牧生产中的研究现状
• 1.1.5 硬脂酰辅酶A去饱和酶基因在医学上的研究现状
• 1.2 SNP的检测方法
• 1.3 实时荧光定量PCR的原理和方法
• 1.3.1 实时荧光定量PCR的原理和类型
• 1.3.2 实时荧光定量的数据分析
• 1.4 本实验的目的、意义和主要研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要实验仪器设备
• 2.1.3 主要药品及试剂的配制
• 2.2 实验方法及步骤
• 2.2.1 RNA和DNA的提取
• 2.2.2 SCD1基因的克隆
• 2.2.3 SNP的检测
• 2.2.4 相关基因荧光定量PCR
• 3 结果与分析
• 3.1 SCD1基因的克隆与分析
• 3.1.1 SCD1基因的扩增结果
• 3.1.2 序列同源性分析
• 3.1.3 分子进化树的构建
• 3.1.4 朗德鹅SCD1基因的蛋白质特性及其结构预测
• 3.1.5 SCD基因蛋白质序列的结构分析
• 3.1.6 SCD基因蛋白质二级结构的预测
• 3.2 SCD1基因的多态性及其与产肝性能的多态性分析
• 3.2.1 PCR扩增
• 3.2.2 SSCP检测
• 3.2.3 SCD1基因不同基因型测序分析
• 3.3 SCD1基因的组织表达规律研究
• 3.3.1 各组织总RNA的提取和检测
• 3.3.2 荧光定量PCR结果分析
• 3.3.3 SCD1基因表达的组织分布规律分析
• 3.3.4 不同填饲阶段SCD1基因的组织表达规律分析
• 4 讨论
• 4.1 SCD1基因的克隆与结构分析
• 4.1.1 朗德鹅SCD1基因的克隆
• 4.2 SCD1基因的多态性及其与产肝性能的关联分析
• 4.2.1 SCD1基因的多态性
• 4.2.2 SCD1基因与产肝性能的关联分析
• 4.3 SCD1基因组织表达规律的研究
• 4.3.1 SCD1基因在组织中的表达规律
• 4.3.2 SCD1基因在不同填饲阶段的表达规律
• 4.3.3 禁食对鹅SCD1基因表达的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表学术论文目录