论文摘要
镰孢菌属(Fusarium Link)是真菌中的一个重要类群,普遍存在于土壤和动植物有机体中。其中许多种类是重要的植物病原菌,可侵染多种经济作物,导致作物减产和引起巨大的经济损失。甘肃省位于我国西部,其镰孢菌种类资源丰富。虽然过去曾有许多学者对甘肃省内的镰孢菌进行过不同程度的分类学和病理学研究,但以现代的镰孢菌分类系统观点对该属真菌开展的研究还很有限。因此,作者根据现代镰孢菌分类系统,在传统形态分类学基础上,对甘肃省内的镰孢菌进行了系统研究,目的是明确甘肃省发生的镰孢菌属真菌的种类和多样性分布特点,为镰孢菌病害的正确病原鉴定及科学防治提供理论依据。在20062007年间,在甘肃省包括高寒草地在内的23个市、县、镇的主要作物产区,采集不同植物及其根际土壤标样,采用常规的方法对各个样品进行真菌分离,共得到862个镰孢菌菌株,根据培养和形态学特征鉴定出16种镰孢菌。采用rDNA ITS和EF-1α序列分析的方法对疑难镰孢菌株进行了比较研究,进一步明确了这些镰孢菌的分类地位。另外,采用ISSR-PCR分子标记技术对来自甘肃省的89株木贼镰孢菌进行了遗传多样性分析。研究结果如下:(1)根据培养和形态学特征鉴定出的16种镰孢菌为木贼镰孢(F. equiseti)、尖镰孢(F. oxysporum)、腐皮镰孢(F. solani)、锐顶镰孢(F. acuminatum)、芬芳镰孢(F. redolens)、轮枝镰孢(F. verticillioides)、大刀镰孢(F. culmorum)、层出镰孢(F. proliferatum)、半裸镰孢(F. semitectum)、弯角镰孢(F. camptoceras)、砖红镰孢(F. lateritium)、三线镰孢(F. tricinctum)、燕麦镰孢(F. avenaceum )、接骨木镰孢(F. sambucinum)、胶孢镰孢(F. subglutinans)和克鲁克威尔镰孢(F. crookwellense)。(2)在分离获得的镰孢菌中,分离频率最高的4个种依次是木贼镰孢(F. equiseti)、尖镰孢(F. oxysporum)、腐皮镰孢(F. solani)以及锐顶镰孢(F. acuminatum),分离频率分别占总鉴定菌株总数的29.93%、28.54%、12.18%和10.09%。其他分离鉴定的镰孢菌包括芬芳镰孢(F. redolens)、轮枝镰孢(F. verticillioides)、大刀镰孢(F. culmorum)、层出镰孢(F. proliferatum)、半裸镰孢(F. semitectum)和弯角镰孢(F. camptoceras),这些镰孢菌的分离频率低于10%,但高于1%。分离频率低于1%的镰孢菌包括砖红镰孢(F. lateritium)、三线镰孢(F. tricinctum)、燕麦镰孢(F. avenaceum )、接骨木镰孢(F. sambucinum)、胶孢镰孢(F. subglutinans)和克鲁克威尔镰孢(F. crookwellense)。(3)16种镰孢菌中的优势种为木贼镰孢和尖镰孢,其分布几乎覆盖在甘肃省的所有市、县;其次是锐顶镰孢和腐皮镰孢,它们分别分布于12个和10个市、县;芬芳镰孢和大刀镰孢分布于8个和5个市、县,其余10个种的分布地区较少,均在5个市、县以下,其中胶孢镰孢和克鲁克威尔镰孢两个种只在兰州1个市发现,而接骨木镰孢只在酒泉市分离得到2株。(4)采用EF-1α和rDNA ITS序列分析方法对6株疑难镰孢菌株进行了研究,经与GenBank中已知菌株序列对比,最后分别确定为层出镰孢(F. proliferatum)1株,芬芳镰孢(F. redolens)1株,尖镰孢(F. oxysporum)1株,锐顶镰孢(F. acuminatum)1株,腐皮镰孢(F. solani)2株。(5)采用ISSR指纹图谱分析技术,对来自甘肃不同地区的89株木贼镰孢菌的基因组DNA的遗传多样性进行了研究。从供试21个引物中筛选出3个引物,并进行扩增和分析。采用NYSTS2.10e软件对矩阵进行遗传分析,形成聚类图。在相似系数为0.675时,可将试验菌株分为6个类群。图谱分析结果表明,ISSR图谱多样性与其菌株的培养性状之间存在一定的相关性,但与寄主和地理来源之间未表现出相关性。