大鼠卵母细胞生长和成熟过程中GV染色质构型的变化

论文摘要

随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁育领域中的应用,卵母细胞成熟的研究受到了极大的重视。研究发现,卵母细胞生发泡（Germinal Vesicle, GV）内染色质具有独特的构型并发生着动态的变化,随着卵母细胞的发育,染色质弥散的状态逐渐转变为凝集形态,这种转变标志着卵母细胞获得了成熟以及进一步发育的能力。本论文以Wistar大鼠为动物模型,使用Hoechst33342对大鼠GV卵母细胞进行染色,研究了大鼠卵母细胞GV染色质构型在卵子生长过程中的变化和不同染色质构卵母细胞的体外成熟能力。实验结果如下:1.根据生发泡内染色质凝集程度和分布情况,大鼠GV卵母细胞染色质构型分为以下4种:弥散构型（GV1）、部分环绕构型（GV2）、环绕加弥散构型（GV3）和环绕构型（GV4）。2. 17日龄的大鼠卵巢中开始出现环绕构型卵母细胞,环绕构型卵母细胞的比例随着日龄的增大而增加。3.在直径<40μm的大鼠卵母细胞中,只存在弥散构型的卵母细胞;直径达到60μm以上时,开始出现环绕构型和环绕加弥散构型的卵母细胞,比例随着直径的增大而增加;在直径>80μm的卵母细胞中,没有发现弥散构型的卵母细胞。4.对27-28日龄的大鼠进行PMSG激素刺激后,COCs+/+卵母细胞中环绕构型卵母细胞的比例显著增加。5.在发情期,卵母细胞中环绕构型卵母细胞的比例显著低于其它三个时期,而环绕加弥散构型的卵母细胞比例显著高于其它三个时期;在发情前期,环绕构型卵母细胞的比例显著高于其它三个时期。6.对3-4月龄的大鼠进行hCG激素刺激后18h到66h,COCs+/+卵母细胞中环形构型染色质的比例逐渐增加。7.环绕构型的卵母细胞在体外成熟中均能够发生GVBD,显著高于环绕加弥散构型的卵母细胞。8.大鼠卵母细胞在添加有HX的α-MEM液中培养24 h, 36 h和48 h,环绕构型卵母细胞的比例显著增高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 卵母细胞染色质构型的概念及染色方法
• 1.2 不同哺乳动物染色质构型的分类标准
• 1.3 卵母细胞染色质构型与卵泡、卵母细胞发生的关系
• 1.4 染色质构型与卵母细胞内成分之间的关系
• 1.5 卵母细胞染色质构型变化的内在机制
• 1.6 本实验研究目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 培养液及操作液的配制
• 2.3 实验动物的激素处理
• 2.4 大鼠发情周期的鉴定
• 2.5 卵母细胞的获取
• 2.6 卵母细胞的染色和分类
• 2.7 卵母细胞的体外成熟
• 2.8 卵丘卵母细胞复合体在HX-成熟液中的体外培养
• 2.9 数据分析
• 3 结果
• 3.1 卵母细胞染色质构型的划分
• 3.2 环绕构型卵母细胞出现的最小日龄
• 3.3 不同日龄大鼠卵母细胞染色质构型的变化规律
• 3.4 不同直径的大鼠卵母细胞染色质构型的变化规律
• 3.5 PMSG 刺激对大鼠卵母细胞染色质构型的影响
• 3.6 大鼠卵母细胞染色质构型随发情周期的变化规律
• 3.7 hCG 刺激后间隔不同时间卵母细胞染色质构型的变化
• 3.8 GV3 和 GV4 型 Wistar 大鼠卵母细胞体外成熟能力
• 3.9 次黄嘌呤对大鼠卵母细胞体外成熟的影响以及卵母细胞染色质构型体外变化规律
• 4 讨论
• 4.1 大鼠卵母细胞染色质构型的分类
• 4.2 能够发生成熟排卵的卵母细胞
• 4.3 卵母细胞的染色质构型体外转变
• 4.4 卵母细胞的成熟能力
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文