无丙种球蛋白血症BTK基因突变研究

论文摘要

背景X连锁无丙种球蛋白血症（XLA）是常见的原发性免疫缺陷病之一。其致病原因是位于X染色体上的BTK基因突变而导致B淋巴细胞分化发育的障碍。目前,尚无研究证实XLA的疾病表型与基因型之间存在明确的相关性,但是仍然不可否定XLA患者不同的BTK基因突变类型可能是影响疾病严重程度的因素之一。目的通过对临床拟诊为X连锁无丙种球蛋白血症的患者进行BTK基因突变分析,就中国大陆XLA患者的地区分布特点、免疫表型、BTK蛋白表达水平和BTK基因突变类型及特点等方面进行探讨,了解中国大陆XLA患者BTK突变的类型及特点,分析基因型和表型之间可能存在的关系。方法1.散射比浊法检测临床拟诊患者血清免疫球蛋白水平,流式细胞法检测外周血T、B淋巴细胞数量。2.使用抗BTK单克隆抗体通过流式细胞技术分析细胞内BTK蛋白表达水平。3.采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）获得患者cDNA。使用8对不同引物分2步扩增BTK cDNA, PCR产物测序。突变结果通过对DNA外显子相应部位扩增、测序证实。结果1.经临床和常规实验室检查被拟诊为XLA的50例患者均有反复发生的细菌性感染,血清免疫球蛋白及外周血B淋巴细胞显著低下。患者主要来自于上海、江苏、浙江、江西、河南等地。2.基因分析40例患者存在BTK基因突变。突变类型包括16例错义突变（L11P、R28C、W124R、H333Y、I355N、R525Q、R544K、R562L、I590F、Y591S、G594E、L616F、S564P、E589D、R525P）,13例无义突变（R13X、W124X、Q234X、W281X、Y598X、Y631X、Q157X、Y631X、K314X、R255X）,4例插入突变（L138insX140、I197insX207、V535insX539、L188insX193）,4例缺失突变（F114delX115、W588delX588、T33delX39、V319delX321）和3例剪接突变（intron6 （-2） A>G. intron17 （-2） A>T）。突变分布于整个BTK基因编码区域,主要位于激酶区。其中14例突变为尚未报道的新突变。8例患者突变发生在错义突变发生频率较高的CpG位点。31名确诊患者的母亲中有26名BTK基因突变位点为嵌合型,证实为携带者,这些患者家族中BTK基因发生突变的频率较一般人高。3.对XLA患者临床表型与基因型进行分析,40例患儿的平均确诊年龄为5.5岁,其中确诊年龄在6岁以上的患儿基因突变类型以造成单个氨基酸改变的错义突变为主。突变类型为错义突变的患儿外周血B淋巴细胞数量及血清免疫球蛋白水平与其他突变类型相比无明显差别。采用Spearman等级相关分析,XLA患者单核细胞BTK表达水平与外周血B细胞数量和血清免疫球蛋白水平之间无明显相关,且突变类型为错义突变的患儿单核细胞BTK表达水平与其他突变类型的患者相比,差别无统计意义。本研究中21例患儿BTK基因序列存在多态性（2031C/T）,其中6例患儿临床伴发严重的关节炎。结论通过我们的研究结合国外较大样本的分析可以看出,我国大陆的XLA患者突变类型多样,以错义突变为主,突变主要分布在影响BTK蛋白的重要结构区域。XLA患者的免疫表型与基因的关系尚不明确。仅引起单个氨基酸替代改变的错义突变可能与较大的确诊年龄有关,且某些位点的错义突变可能与较高的外周血B淋巴数量和血清免疫球蛋白水平以及与正常人近乎相同的BTK蛋白表达水平有关。本研究中21名XLA患者存在BTK基因多态性（2031C/T）,而这种多态性可能与疾病的某些伴发症状有关。

论文目录

• 缩略词
• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表及获奖论文
• 附录