NO前体/供体在大鼠脑缺血中作用研究及OX42和MAP2阳性细胞反应的影响

论文摘要

研究背景与目的:自从80年代内源性一氧化氮（Nitric oxide,NO）被发现以来,其广泛而重要的生理及病理作用已越来越引起人们的重视。作为一种重要的信使分子广泛参与生物体内的各种病理生理过程,具有非常广泛的生物作用。近年来,NO在急性脑缺血中的双重作用日益受到人们关注,其既表现为神经保护作用,又有神经毒性作用。NO起神经保护作用还是毒性作用主要取决于NO生成的量、浓度、生成的部位、作用部位、产生的时间和NO氧化还原状态。我们的实验中建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,局部介入给予NO的前体L-精氨酸（L-Arginine,L-ARG）和供体硝酸甘油（Nitroglycerine, NG）,结合神经行为学,TTC、HE染色观察NO前体/供体在脑缺血中的作用;同时探讨NO前体/供体对脑缺血过程中OX42和MAP2阳性细胞反应性的影响。材料和方法:以66只健康成年雄性Sprague-Dawley白色大鼠为研究对象。按照随机化原则分为4组,假手术组（n=12）;标准MCAO模型组（n=18）;NG给药组（n=18）:再灌注即刻局部介入给予NG ;L-ARG组（n=18）:再灌注即刻局部介入给予L-ARG;各组根据处死时间不同,再分为2个亚组:缺血2h再灌注3h和缺血2h再灌注24h组,3h时间点6只大鼠。24h时间点假手术组6只老鼠,其余3组12只老鼠,于再灌注3h和再灌注24h分别进行行为学评分。然后断头取脑,用红四氮唑（2,3,5 -triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色测定脑梗死体积,每只大鼠的相邻脑切片分别进行苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin, HE）染色观察组织学变化,小鼠抗CD11b/c单克隆抗体（OX42）免疫组织化学（IHC）染色和微管相关蛋白-2（MAP2）免疫荧光染色检测神经元改变。结果:（一） Longa评分:再灌注3h L-ARG和NG组Longa评分与MCAO模型组Longa评分相比有统计学意义,（P<0.025）。再灌注24h,L-ARG和NG组Longa评分与MCAO模型组Longa评分相比无统计学意义（P>0.025）（二）TTC梗死体积:再灌注24h时间点,TTC染色显示两个介入给药组苍白区明显减小,与MCAO模型组相比有显著性差异（P<0.05）。（三）病理形态学观察1. HE染色:再灌注3h时间点各组大鼠脑组织HE染色未见明显神经元脱失。再灌注24h时间点MCAO模型组神经元大量脱失。NG、L-ARG组神经元脱失不明显,有部分锥体状或圆型神经元保留。2. OX-42:再灌注3h和24h两个时间点,NG、L-ARG组与MCAO模型组相比大鼠脑组织皮层和海马CA1、CA3区小胶质细胞细胞着色较浅,阳性细胞数量少,和MCAO模型组相比有统计学意义（P<0.05）。3. MAP-2:再灌注3h和24h两个时间点,NG和L-ARG组与MCAO模型组相比大鼠脑组织皮层和海马CA1、CA3区阳性细胞数量增加,免疫染色强度增强,（MAP2阳性细胞平均光密度明显降低）。大鼠脑组织皮层和海马CA1,CA3区可见绿色细长条索状结构,排列规则。提示大量细胞骨架结构修复,与MCAO模型组具有显著性差异（P<0.05）。结论:1.通过神经行为学,TTC、HE染色观察等组织学方法分析,NO前体/供体介入给药对脑缺血具有明显的神经保护作用。2.在脑血管病早期介入给与NO前体/供体可能通过抑制小胶质细胞的活化,降低小胶质细胞阳性细胞表达。以及抑制MAP2降解,修复大量细胞骨架结构。起到脑保护作用。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 实验材料
• （五） 实验方法
• （六） 结果
• （七） 讨论
• （八） 结论
• （九） 附图
• （十） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢