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RNA干扰livin基因对肿瘤细胞电离辐射生物效应的影响

2020-12-07阅读(932)

RNA干扰livin基因对肿瘤细胞电离辐射生物效应的影响

论文摘要

Livin是IAP家族的重要成员,具有独特的分子结构,在肿瘤组织中特异性表达。Livin具有抑制细胞凋亡、参与细胞周期调控等生物学作用,与肿瘤细胞对辐射及化疗药物的耐受性增强密切相关,是目前肿瘤靶向治疗研究关注的重要基因之一。本研究旨在探讨Livin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡过程中所发挥的生物学作用。采用Western Blot检测X射线照射后HeLa细胞Livin蛋白表达变化,采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期及细胞凋亡的变化规律。结果显示,Livin在HeLa细胞中异常高表达并且具有较高的转录水平;单纯X射线照射不能诱导HeLa细胞发生凋亡;受照细胞的G2/M期细胞比例随受照剂量的增高而显著增加,并且在接受4.0 Gy照射后随着培养时间延长,G2/M期细胞比例也显著增加。由于Livin具有组织表达特异性,使其成为RNAi技术应用的理想靶向基因。根据RNAi原理,利用pSilencer3.1-H1 neo载体能够转录产生小的发卡状siRNA的特点,本研究成功构建了以livin基因为靶点的pSilencer3.1-H1 neo-livin载体,在mRNA水平干扰Livin蛋白表达,进而对Livin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡过程中所产生的生物学影响进行研究。结果表明,RNA干扰livin基因,Livin蛋白表达受抑制后,电离辐射可以显著诱导HeLa细胞凋亡,并且在照射后12h干扰组细胞G2/M期比例显著高于空质粒组,表现明显G2期阻滞。以上结果说明,干扰Livin蛋白表达与辐射相结合可诱导HeLa细胞凋亡,明显提高肿瘤细胞的辐射敏感性。本研究结果将为增强肿瘤辐射敏感性、提高放射治疗疗效提供实验依据。有重要理论意义及潜在应用价值。

论文目录

  • 内容提要
  • 英文缩写
  • 第一章 绪论
  • 1.凋亡抑制蛋白 （inhibitor of apoptosis protein） IPA
  • 2.Livin 的生物学特性
  • 3. Livin 的功能及作用机制
  • 4. Livin 与肿瘤
  • 5. RNAi 技术与应用
  • 第二章 材料与方法
  • 1. 主要试剂及器材
  • 1.1 试剂
  • 1.2 器材
  • 2. 主要仪器
  • 3. 细胞株
  • 4. 细胞生物学实验方法
  • 4.1 培养液配制
  • 4.2 小牛血清制备
  • 4.3 胰酶配制
  • 4.4 细胞培养
  • 4.5 细胞冻存
  • 4.6 细胞转染
  • 4.7 照射条件
  • 4.8 Western Blot 检测细胞蛋白表达
  • 4.9 FCM 检测细胞周期
  • 4.10 FCM 检测细胞凋亡
  • 5. 细菌培养技术
  • 5.1 菌种
  • 5.2 细菌LB 培养基的配制
  • 5.3 细菌复苏
  • 5.4 细菌培养
  • 5.5 细菌冻存
  • 5.6 感受态菌的制备
  • 5.7 细菌转化
  • 5.8 质粒提取
  • 5.9 质粒纯化法
  • 6. 分子生物学实验方法
  • 6.1 载体的构建
  • 6.2 含pSilence13.1-H1 neo 的阳性克隆DNA 测序鉴定
  • 6.3 RT-PCR
  • 7. 统计学方法
  • 第三章 实验结果
  • 1. X 射线对LIVIN 蛋白表达水平的影响
  • 1.1 不同剂量X 射线照射对HeLa 细胞livin 蛋白表达的影响
  • 1.2 4.0 Gy X 射线照射对HeLa 细胞livin 蛋白表达的影响
  • 2. X射线对LIVIN 基因转录水平的影响
  • 2.1 不同剂量照射对HeLa 细胞livin 基因转录水平的影响
  • 2.2 4.0Gy X 射线照射HeLa 细胞对livin 基因转录水平的影响
  • 3. X 射线照射对HELA 细胞周期进程的影响
  • 3.1 不同剂量X 射线照射对HeLa 细胞周期进程的影响
  • 3.2 4.0 Gy X 射线照射对HeLa 细胞周期进程的影响
  • 4 X 射线对HELA 细胞凋亡的影响
  • 4.1 不同剂量照射HeLa 细胞对细胞凋亡变化的影响
  • 4.2 4.0 Gy X 射线照射HeLa 细胞对细胞凋亡变化的影响
  • 5 重组干扰载体PSILENCER3.1-H1 NEO-LIVIN 的构建及鉴定
  • 5.1 pSilence13.1-H1 neo-livin 干扰质粒的构建
  • 5.2 pSilence13.1-H1 neo-livin 干扰质粒的鉴定
  • 5.3 重组干扰载体干扰效率检测
  • 6 X 射线对稳定转染SHRNA 的HELA 细胞LIVIN 基因转录水平影响
  • 6.1 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后12 h ，livin 基因转录水平的变化
  • 6.2 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后24 h ，livin 基因转录水平的变化
  • 6.3 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后48h，livin 基因转录水平的变化
  • 7 X 射线对转染SHRNA 的HELA 细胞LIVIN 蛋白表达的影响
  • 7.1 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后12h livin 蛋白表达的变化
  • 7.2 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后24h，livin 蛋白表达的变化
  • 7.3 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后48h，livin 蛋白表达的变化
  • 8 X 射线对稳定转染SHRNA 的HELA 细胞周期分布的影响
  • 8.1 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后12h 细胞周期变化
  • 8.2 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后24h 细胞周期变化
  • 8.3 稳定转染shRNA 的HeLa 细胞给予4.0 Gy X 射线照射后48h 细胞周期变化
  • 9 X 射线对转染SHRNA 的HELA 细胞凋亡的影响
  • 第四章 讨论
  • 1. 电离辐射与 livin 表达
  • 2. 干扰载体与干扰效率
  • 3. Livin 在细胞周期调控中的作用
  • 4. Livin 在细胞凋亡中的作用
  • 5. 研究展望
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻博期间发表的学术论文
  • 攻博期间出版的专著
  • 致谢
  • 中文摘要
  • ABSTRACT

    • 相关论文文献

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