硒颉颃氟对鸡免疫毒性的研究

硒颉颃氟对鸡免疫毒性的研究

论文摘要

本研究以8d龄鸡为试验动物,在日粮中添加一定浓度的氟及硒与氟,复制鸡亚慢性氟中毒鸡模型和硒颉颃氟中毒鸡模型以研究氟的免疫毒性机理以及硒对氟免疫毒性的颉颃作用及作用机制。通过对试验鸡临床表现、剖检变化、病理组织学观察、凋亡现象以及免疫组织p53、Cu-Zn-SOD mRNA的表达等指标的测定,得出以下结论:1.氟可影响鸡体内抗氧化系统,使血清和免疫组织中MDA含量持续升高,GSH-Px、SOD活性在试验中后期明显降低,硒可提高GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量,说明硒能颉颃氟对鸡的抗氧化损伤作用。2.氟能降低外周血、脾脏中CD4+T淋巴细胞亚群百分比,降低CD4+/CD8+值,打破细胞亚群间的平衡;加硒后可使外周血、脾脏中CD4+T淋巴细胞亚群百分比,CD4+/CD8+值增加,减轻由氟引起的淋巴细胞亚群间的失衡,说明硒可通过提高淋巴细胞的免疫功能进而提高氟中毒鸡的免疫功能。3.氟中毒可引起鸡免疫组织细胞凋亡,加硒后可减少细胞凋亡,氟引起线粒体的损伤,硒能减轻氟对细胞器的损伤。4.氟能降低免疫组织内Cu-Zn-SOD mRNA的表达水平,进而引起免疫组织抗氧化酶Cu-Zn-SOD活性降低,硒能颉颃氟所致的免疫细胞Cu-Zn-SOD mRNA表达量的降低,从分子水平上说明硒能颉颃氟对鸡的抗氧化损伤作用。5.氟能增加免疫细胞内p53 mRNA的表达水平,进而诱导免疫细胞凋亡,硒能颉颃氟所致的免疫细胞p53 mRNA表达量的增加,进而减轻氟所致免疫细胞的凋亡。本试验在成功复制出鸡亚慢性氟中毒模型及硒颉颃氟中毒模型基础上,通过对鸡的病理组织学观察、抗氧化功能、淋巴细胞CD4+、CD8+细胞亚群、淋巴细胞凋亡以及相关基因表达等指标的测定,从器官、细胞、亚细胞和分子水平上探讨了氟的鸡免疫毒性作用,揭示了硒可在多个环节颉颃氟的免疫毒性,硒能颉颃氟所引起的免疫器官损伤。上述结果为判断和分析氟免疫毒性及硒颉颃效应提供了理论依据,为畜禽氟中毒的防治具有重要意义。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 引言
  • 1.1 硒的概况
  • 1.1.1 硒的基本情况
  • 1.1.2 硒的代谢
  • 1.1.3 硒的生物学功能
  • 1.1.4 硒的作用机制
  • 1.2 氟的概况
  • 1.2.1 氟的营养作用
  • 1.2.2 氟的代谢
  • 1.2.3 氟中毒的症状
  • 1.2.4 氟的毒性作用机制
  • 1.2.5 氟免疫毒性的研究进展
  • 1.3 硒与氟
  • 1.4 试验的目的和意义
  • 2 材料与方法
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 试验动物分组与处理
  • 2.1.2 样品的采集与处理
  • 2.2 试验仪器
  • 2.3 实验试剂
  • 2.4 各项指标的测定方法
  • 2.4.1 鸡体重、脏器重及其脏器系数测定
  • 2.4.2 病理形态学检查
  • 2.4.3 饲料、饮水、血清及组织中氟元素的测定
  • 2.4.4 T 淋巴细胞亚群的测定
  • 2.4.5 抗氧化功能指标的检测
  • 2.4.6 免疫组织细胞凋亡研究
  • 2.4.7 免疫组织Cu-Zn-SOD mRNA 表达的检测
  • 2.4.8 免疫组织凋亡相关基因表达的检测
  • 2.5 试验数据处理方法
  • 3 试验结果
  • 3.1 临床表现及剖检变化
  • 3.1.1 临床表现
  • 3.1.2 剖检变化
  • 3.2 体重、组织重及脏器系数变化
  • 3.2.1 体重变化
  • 3.2.2 组织重量变化
  • 3.2.3 脏器系数变化
  • 3.3 病理变化
  • 3.3.1 免疫器官光镜观察
  • 3.3.2 免疫细胞超微结构观察
  • 3.4 氟含量测定结果
  • 3.4.1 饮水中氟含量测定结果
  • 3.4.2 血清氟含量测定结果
  • 3.4.3 免疫器官氟含量测定结果
  • 3.5 淋巴细胞亚群测定结果
  • 3.6 抗氧化功能的检测结果
  • 3.6.1 GSH-Px 活性的检测结果
  • 3.6.2 SOD 活性的检测结果
  • 3.6.3 MDA 含量的检测结果
  • 3.7 免疫器官淋巴细胞凋亡检测结果
  • 3.8 SOD 基因测定结果
  • 3.8.1 总RNA 的鉴定
  • 3.8.2 Cu-Zn-SOD 基因的扩增和竞争模板的构建
  • 3.8.3 标准曲线的建立
  • 3.8.4 竞争性PCR 分析基因
  • 3.9 凋亡相关基因测定结果
  • 3.9.1 PCR 产物鉴定结果
  • 3.9.2 标准曲线的建立
  • 3.9.3 竞争性PCR 分析p53 表达量
  • 4 讨论
  • 4.1 试验动物模型的建立
  • 4.2 硒颉颃氟对鸡免疫器官抗氧化功能损伤的作用
  • 4.2.1 硒颉颃氟对鸡免疫器官MDA 含量的影响
  • 4.2.2 硒颉颃氟对鸡体内GSH-Px 活性的影响
  • 4.2.3 硒颉颃氟对鸡体内SOD 活性及其mRNA 的影响
  • 4.3 硒颉颃高氟抑制鸡免疫功能的作用及其机理
  • 4.3.1 硒颉颃高氟对鸡免疫器官发育的毒害作用
  • 4.3.2 硒颉颃氟致免疫细胞的凋亡
  • 4.3.3 硒颉颃氟对淋巴细胞亚群的影响
  • 4.4 总结
  • 5 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录
  • 附录 A:临床表现图片
  • 附录 B:脾脏光镜观察图片
  • 附录 C:法氏囊光镜观察图片
  • 附录 D:胸腺光镜观察图片
  • 附录 E:脾脏电镜观察图片
  • 附录 F:法氏囊电镜观察图片
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