论文摘要
目的本研究拟应用蛋白质组学方法,建立人分辨率高和重复性好的肝癌组织（门静脉转移组/门静脉非转移组）及正常肝组织的二维电泳图谱,筛选并鉴定癌组织与正常肝组织以及门静脉转移的肝癌组织和门静脉无转移的肝癌组织间差异表达蛋白并进行表达水平验证,并将转移相关蛋白表达强度与肿瘤分子成像特征进行相关性研究。为最终发现肝癌诊断、预后生物标志物以及治疗靶标提供重要信息。方法收集术后新鲜肝癌标本和距癌旁1.5cm以上正常肝组织保存于-80℃备用。根据病理诊断结果将标本分为3组:门静脉转移的肝癌组（肝癌转移组）、门静脉未受侵犯的肝癌组（肝癌非转移组）、正常肝组织组（正常组）,每组各5例。提取组织总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）技术得到各组凝胶图谱。采用PD-quest 7.3软件进行合成、对比和差异分析,识别肝癌转移组、肝癌非转移组、正常组之间差异表达蛋白斑点;选取差异蛋白质点,胶内酶解后行肽指纹图分析及网上数据库鉴定,鉴定差异蛋白质。然后采用免疫印迹（Western Blot）验证部分差异表达蛋白（annexin A3、laminB1、HSP27、nm23-H1、Prohibitin、Triosephosphate isomerase（EC5.3.1.1）（TIM））的表达水平。应用免疫组织化学方法进一步在临床标本中检测这些蛋白的表达情况,分析其表达水平与肿瘤分子影像特征的相关性。结果建立了正常肝组织和肝癌双相凝胶电泳图谱,多数蛋白质点集中在pH4～8、分子量20～100KDa范围。选择在肝癌转移组和肝癌非转移组中表达均高于正常组的13个点进行质谱分析,并鉴定出在肝癌转移组中表达高于肝癌非转移组中表达的7种蛋白质为annexinA3、laminB1、annexin A1、transgelin-2、TCP1、PRP2、RANBP Protein。Western Blot检测肝癌和配对正常肝组织中annexin A3、laminB1、HSP27的表达发现,肝癌中3种蛋白的表达强度均高于正常肝组织中的表达;而抑癌基因表达蛋白nm23-H1、Prohibitin、Triosephosphate isomerase（EC 5.3.1.1）（TIM）在肝癌组织中表达降低。在以上对筛选蛋白进行初步验证的基础上,采用免疫组织化学方法检测annexin A3和nm23-H1在组织样本中的表达情况,探讨annexin A3和nm23-H1表达水平的病理意义,annexin A3在正常肝组织组（正常组）、肝癌门静脉未受侵犯组（非转移组）、肝癌伴门静脉转移（转移组）中的表达阳性率分别为10%,35%,92.5%,方差分析提示多组间比较具有显著性差异（x2=57.667,P＜0.001）。进一步进行两组间的比较发现:annexin A3阳性表达率在正常组分别与非转移组、转移组,非转移组与转移组组间均有显著性差异。nm23-H1在正常组、非转移组、转移组中的表达阳性率分别为85%,82.5%,15%,方差分析提示多组间比较具有显著性差异（x2=52.95,P＜0.001）。进一步进行两组间的比较发现:正常组和非转移组间的nM23-H1阳性表达率无显著性差异（x2=0.092,P=0.762）。正常组与转移组间,非转移组与转移组间的nm23-H1阳性表达率均有显著性差异（P＜0.001）。进一步探讨annexin A3和nm23-H1表达水平与肿瘤分子成像特征的相关性。PET-CT显示门静脉主干及分支出现充盈缺损组与非充盈缺损组间annexin A3及nm23-H1均有显著性差异（P＜0.001）,而肿瘤大小、形态、糖代谢SUV组间annexin A3及nm23-H1均无显著性差异（P＞0.05）。结论本研究应用蛋白质组学方法比较人肝正常组织、肝癌门静脉未受侵犯组、肝癌伴门静脉转移间的差异表达蛋白,发现正常组织和肝癌组织间,以及门静脉转移和门静脉非转移组间均存在蛋白质表达的差异,对部分差异蛋白进行了质谱分析,鉴定了可能参与肝癌发生和发展相关蛋白。通过免疫印迹方法验证结果与蛋白质组学方法结果一致。应用免疫组织化学方法进一步研究部分差异表达蛋白的表达水平及其与肿瘤分子成像特征的相关性,发现annexin A3和nm23-H1不仅在肝正常组织、肝癌中的表达率存在差异,而且这两种蛋白在肝癌转移组中的表达率与肝癌门静脉未受侵犯组间存在差异,提示annexin A3和nm23-H1可能与肝癌转移相关,可望作为诊断和预测病变预后的侯选标志物。
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标签：肝癌论文; 蛋白质组学论文; 钙磷脂结合蛋白论文; 转移抑制蛋白论文; 线计算机体层摄影论文;