绞股蓝抗皮肤光老化的实验研究

论文摘要

目的：本项研究依据中医药基础理论，运用生化分析法及分子生物学方法，观察紫外线照射引起的无毛小鼠皮肤光老化模型皮肤组织中线粒体DNA片段缺失、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）的活性，丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）含量及其皮肤组织结构及羟脯氨酸（HYP）含量的变化以及中药绞股蓝的干预作用及作用机制。 材料与方法：将昆明种无毛小鼠随机分成8组：正常对照组（A）、模型对照组（B）、外用绞股蓝低剂量组（C）、外用绞股蓝中剂量组（D）、外用绞股蓝高剂量组（E）、灌胃绞股蓝低剂量组（F）、灌胃绞股蓝中剂量组（G）、灌胃绞股蓝高剂量组（H）。模拟日光中UV长期照射，造成皮肤光老化模型。照射同时，给药组外用或灌胃绞股蓝。HE染色，40倍光镜下观察皮肤组织结构改变，并以生化分析方法测定SOD、CAT、GSH-PX活性，MDA、H2O2、HYP含量；运用PCR法测定皮肤组织中mtDNA（3867bp）片段缺失情况。结果：模型组无毛小鼠皮肤组织SOD、GSH-PX、CAT活性明显降低，MDA、H2O2含量显著增加（P＜0.05）；HYP含量明显减少；组织病理切片呈现光老化状态。与模型组比较，外用及灌胃绞股蓝中剂量组CAT活性明显改善（P＜0.05）；灌胃绞股蓝低剂量组、外用绞股蓝中剂量以及二者的高剂量组均可提高GSH-PX活性，降低H2O2含量；所有给药组皮肤组织中MDA含量均有不同程度的下降，且均具有显著性差异；外用及灌胃绞股蓝低、中剂量组的皮肤组织中SOD活力增高且具有显著差异（分别是P＜0.01、P＜0.05）；外用绞股蓝低剂量组、外用及灌胃绞股蓝中、高剂量组的皮肤组织中HYP含量均有明显增高。PCR法检测结果显示，所有模型组小鼠皮肤组织中均存在mtDNA（3867bp）大片段缺失，而正常对照组以及给药组中中、高剂量组小鼠皮肤组织中mtDNA（3867bp）大片段缺失的发生率和缺失占总mtDNA的百分比均显著低于模型组。结论：利用紫外线照射成功模拟了皮肤光老化动物模型。紫外线造成的无毛小鼠光老化皮肤组织具有明显的氧化损伤，皮肤组织中mtDNA发生大片段缺失，中药绞股蓝可通过清除自由基，提高机体抗氧化能力，减轻无毛小鼠皮肤组织氧化损伤，减少其组织中mtDNA片段缺失的形成，维护mtDNA活性，防止其代谢能力下降，从而延缓或防治无毛小鼠皮肤光老化的作用。另外绞股蓝还可能是通过提高皮肤中羟脯氨酸的含量来延缓皮肤光老化动物模型皮肤衰老。

论文目录

• 中英文名词术语对照
• 英文摘要
• 中文摘要
• 前言
• 实验部分（实验材料、实验方法）
• 1 实验动物模型的建立、标本制备及实验用药的准备
• 1.1 实验动物及分组方法
• 1.2 动物饲养条件
• 1.3 造模
• 1.4 实验药物及给药方法
• 1.5 取材方法
• 1.6 讨论
• 1.6.1 紫外线的作用
• 1.6.2 动物模型
• 2 实验无毛小鼠光老化皮肤组织形态学、羟脯氨酸含量变化及中药绞股蓝对其影响的实验研究
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 皮肤组织形态学检查结果显示
• 2.2.2 外用绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织中HYP含量测定结果
• 2.2.3 灌胃绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织中HYP含量测定结果
• 2.3 讨论
• 3 皮肤组织中SOD活性与MDA含量的变化及中药绞股蓝对其影响
• 3.1 料及方法
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 实验仪器、试剂
• 3.1.3 实验方法
• 3.1.4 统计学处理
• 3.2 结果
• 3.2.1 外用绞股蓝各组皮肤组织SOD活性测定结果显示
• 3.2.2 灌胃绞股蓝各组皮肤组织SOD活性测定结果显示
• 3.2.3 外用绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织中MDA含量测试结果
• 3.2.4 灌胃绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织中MDA含量测试结果
• 3.3 讨论
• 2O₂含量与CAT、GSH活性变化及中药绞股蓝对其影响'>4 皮肤组织中H₂O₂含量与CAT、GSH活性变化及中药绞股蓝对其影响
• 4.1 实验材料及方法
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 实验仪器、试剂
• 4.1.3 实验方法
• 4.1.4 统计学处理
• 4.2 结果
• 4.2.1 外用绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织CAT活力测定结果
• 4.2.2 灌胃绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织CAT活力测定结果
• 4.2.3 外用绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织GSH-PX活力测定结果
• 4.2.4 灌胃绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织GSH-PX活力测定结果
• 2O₂含量测定结果'>4.2.5 外用绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织H₂O₂含量测定结果
• 2O₂含量测定结果'>4.2.6 灌胃绞股蓝各组无毛小鼠皮肤组织H₂O₂含量测定结果
• 4.3 讨论
• 5 皮肤组织中mtDNA片段缺失及中药绞股蓝对其影响的实验研究
• 5.1 实验材料及方法
• 5.1.1 小鼠皮肤线粒体DNA制备试剂的配制
• 5.1.2 检测小鼠皮肤组织内粗线粒体
• 5.1.3 线粒体DNA PCR扩增 琼脂糖凝胶电泳
• 5.1.4 统计学处理
• 5.2 结果
• 5.2.1 PCR扩增条带
• 5.2.2 mtDNA突变率及其缺失比例
• 5.3 讨论
• 讨论
• 1 皮肤衰老及其分类
• 2 皮肤衰老尤其皮肤光老化发生的机制
• 2.1 自由基学说
• 2.2 交联学说
• 2.3 神经内分泌调节学说
• 2.4 免疫学说
• 2.5 线粒体DNA损伤缺失说
• 2.6 基因程控学说或DNA学说（遗传学因素）
• 2.7 差误学说
• 2.8 差异蛋白质降解说
• 2.9 端粒缩短学说
• 3 祖国医学对皮肤衰老发生机制的认识
• 3.1 五脏虚损说
• 3.1.1 心与皮肤衰老
• 3.1.2 肺与皮肤衰老
• 3.1.3 脾与皮肤衰老
• 3.1.4 肝与皮肤衰老
• 3.1.5 肾与皮肤衰老
• 3.2 阴阳失衡说
• 3.3 气血津液与皮肤衰老
• 3.4 邪实说
• 3.5 精、气、神虚衰说
• 4 现代医学对皮肤衰老的防治
• 4.1 遮光剂（防晒剂）
• 4.2 抗氧化剂
• 4.2.1 SOD（超氧化物歧化酶）
• 4.2.2 Vit E（维生素E）
• 4.3 细胞分化诱导剂
• 4.4 雌激素
• 4.5 物理疗法
• 4.5.1 针灸疗法
• 4.5.2 激光疗法
• 4.5.3 微波疗法
• 4.6 化学剥脱术
• 4.7 手术疗法
• 4.7.1 皮肤磨削术
• 4.7.2 皮下切割术
• 5 祖国医学对皮肤衰老的治疗
• 5.1 中药拮抗自由基抗皮肤衰老
• 5.2 中药修复胶原抗皮肤衰老
• 5.3 类雌激素样作用
• 5.4 中药调节免疫功能抗皮肤衰老
• 5.5 中药改善皮肤微循环抗皮肤衰老
• 5.6 中药提取物抗皮肤衰老
• 6 衰老、自由基、线粒体DNA之中医学探源
• 6.1 气虚、衰老、自由基、线粒体DNA损伤
• 6.2 精亏、衰老、自由基、线粒体DNA损伤
• 7 本实验选药依据
• 7.1 绞股蓝的成分与作用
• 7.1.1 在免疫调节方面的作用
• 7.1.2 绞股蓝具有抗肿瘤作用
• 7.1.3 抗衰老作用
• 7.1.4 对脂质代谢的影响
• 7.1.5 对心血管系统的作用
• 7.1.6 对血凝和血小板聚集的影响
• 7.1.7 对中枢神经系统的作用
• 7.1.8 其他作用
• 7.2 现有绞股蓝产品
• 7.2.1 茶品
• 7.2.2 药品、保健品
• 7.3 绞股蓝化妆品为空白
• 8 中医药抗皮肤衰老的发展前景与发展方向
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述一 皮肤光老化发生机制及中医药延缓皮肤衰老的研究近况
• 综述二 绞股蓝的研究概况
• 综述三 紫外线与皮肤的关系
• 综述四 皮肤光老化及其防治
• 个人简历
• 致谢