对定向诱导MSC各分化时期的研究

论文摘要

[目的]：大鼠骨髓间充质干细胞（rabbit mesenchymal stem cells, MSC）分离纯化培养后,诱导为成骨细胞、心肌细胞和胰岛样细胞,观察不同分化阶段的细胞形态、检测特殊因子或标志物的表达变化。[方法]：体外分离培养鼠骨髓间充质干细胞,采用文献中的诱导方法诱导,分别于第3、7、14、21天倒置荧光显微镜动态观察细胞形态的变化；并通过RT-PCR技术和酶联免疫吸附技术检测干细胞在诱导不同阶段移植特殊因子或标志物的表达变化。[结果]：MSC能够正常贴壁成长,抗原表达为CD34-/CD45-/CD73+/CD105+。倒置萤光显微镜观察下细胞形态发生明显变化,RT-PCR检测结果显示GATA-4、Nkx2.5、Sarcomericactin和Connexin-43mRNA向诱导成心肌细胞的过程中表达持续增加,Isulin 1、Isulin 2、CK-19、nestin、Glut2和pdxl mRNA表达在向胰岛样细胞诱导的过程中持续增加,说明在诱导剂诱导下能够向诱导为成骨细胞、心肌细胞和胰岛样细胞分化。[结论]：①建立了GFP标记的RMSC的体外分离、培养及鉴定的技术平台。②建立了MSC向心肌细胞、成骨细胞和胰岛样细胞分化的诱导体系。⑧RT-PCR结果显示MSC成功向心肌细胞和胰岛样细胞分化,并分泌相应细胞因子。④酶联免疫吸附实验结果显示MSC向胰岛样细胞和成骨细胞分化,并且分泌胰岛素和碱性磷酸酶。

论文目录

• 英文缩写及中英文对照
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 骨髓间充质干细胞的特性及临床应用
• 1.2 骨髓间充质干细胞的诱导分化特性
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3 结果
• 3.1 细胞形态学、抗原表达分析
• 3.2 骨髓间充质干细胞的诱导
• 3.3 ELISA测定骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导过程中碱性磷酸酶的含量
• 3.4 ELISA测定骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞诱导过程中上清液胰岛素的含量
• 3.5 RT-PCR检测骨髓间充质干细胞向心肌细胞诱导过程中的GATA-4、Nkx2.5和Connexin-43mRNA表达
• 3.6 RT-PCR检测骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞诱导过程中的IGF-1、PDX-1和nestin mRNA表达
• 4 讨论
• 4.1 骨髓间充质干细胞的分离、培养
• 4.2 骨髓间充质干细胞的诱导分化体系
• 全文小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 在读期间主要成绩
• 致谢