HBV感染：宿主CD8+T淋巴细胞应答与临床转归

论文摘要

[目的]:研究HBV感染后不同临床转归的人群之间细胞免疫状态的差异,探讨慢性HBV感染的免疫学发病机制。[方法]:从2006年10月至2008年4月就诊于北京协和医院肝炎门诊及秦皇岛市第三医院感染科门诊的患者中选取13名慢性乙型肝炎患者、10名慢性HBV携带者、10名非活动性HBsAg携带者,并筛选了13名亚临床HBV感染康复者和3例健康人对照。使用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞CCR7/CD27亚群、流式细胞仪检测非特异性CD8+T细胞应答水平以及HBcAg特异性CD8+T细胞应答水平。我们自行设计了HBcAg肽段库作为CD8+T细胞的特异性刺激原。该肽段库共包含35条肽段,按肽段序列先后分别组成C1-C12、C13-C24、C25-C35三个肽段池。使用PMA+Ionomycin作为非特异性刺激原。[结果]:1.慢性乙肝患者组外周血CD8+CCR7-CD27-T细胞比例为57.1%±20.5%,显著高于慢性HBV携带者组、非活动性HBsAg携带者组和HBV康复者组;慢性乙肝患者组CD8+CCR7+CD27+T细胞比例为23.1%±14.6%,显著低于其他慢性HBV感染组及HBV康复者组。2.PMA+Ionomycin刺激20小时后,慢性乙型肝炎患者组、慢性HBV携带者组及非活动性HBsAg携带者组中INF-γ阳性的CD8+T淋巴细胞比例分别为12.405%（7.716%,17.320%）、12.850%（7.042%,23.007%）及20.333%（15.345%,29.698%）;非活动性HBsAg携带者组CD8+CCR7-CD27+T细胞和CD8+CCR7-CD27-T细胞INF-γ阳性细胞比例分别为11.042%（5.219%,14.750%）和44.409%（25.823%,47.427%）,高于慢性乙肝患者组和慢性HBV携带者组。3.慢性乙型肝炎组、慢性HBV携带者组、非活动性HBsAg携带者组以及HBV康复者组中HBcAg特异性CD8+T细胞对AA61-130肽段池的INF-γ反应强度分别为0.042%（0,0.076%）、0（0,0.032%）、0.068%（0.029%,0.151%）和0.005%（0,0.010%）;非活动性HBsAg携带者组对于该肽段池的应答强度显著高于慢性HBV携带者组和HBV康复者组（P＜0.009）,高于慢性乙肝患者组。对AAs 61-130肽段池的应答中,非活动性HBsAg携带者组CD8+CCR7-CD27+T细胞产生INF-γ的比例为0.103%（0.063%,0.234%）,显著高于慢性乙肝患者组、慢性HBV携带者组和HBV康复者组（P＜0.009）。非活动性HBsAg携带者组、慢性乙肝患者组CD8+CCR7-CD27-T细胞的INF-γ应答强度分别为0.034%（0.008%,0.131%）和0.033%（0%,0.110%）,均显著高于康复者组（P＜0.009）。[结论]:1.慢性HBV感染者存在CD8+T细胞功能异常,非活动性HBsAg携带者对非特异性刺激的细胞免疫功能优于慢性乙肝患者和慢性HBV携带者。2.非活动性HBsAg携带者体内HBcAg特异性CTL应答强于慢性乙肝患者、慢性HBV携带者和HBV康复者。HBcAg特异性CTL应答反应对机体清除病毒和抑制病毒复制有重要作用。3.HBcAg中可以激发机体产生免疫应答清除病毒的抗原位点主要位于AA1-130覆盖的区域内。4.CD8+CCR7-CD27+T淋巴细胞在慢性HBV感染的免疫发病机制中可能具有重要作用。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 研究背景
• 2 材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 样本采集和处理
• 2.3 分离及冻存血浆和PBMC
• 2.4 细胞表面和胞内染色检测
• 2.5 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 外周血CD8+T淋巴细胞CCR7/CD27表型检测
• 3.2 非特异性CD8+T淋巴细胞应答
• 3.3 HBV特异性CD8+T淋巴细胞应答
• 3.4 CCR7、CD27表达与CTL应答的相关性分析
• 4 讨论
• 4.1 CD8+T淋巴细胞CCR7/CD27亚群检测的意义
• 4.2 CD8+T细胞及其不同亚群对非特异性刺激的应答比较及其意义
• 4.3 HBcAg特异性CD8+T淋巴细胞应答
• 4.4 CD8+T细胞表面分子CCR7及CD27与CTL应答强度的相关性分析
• 5 结论
• 6 参考文献
• 文献综述
• 附录
• 致谢