酸性α-淀粉酶产生菌的筛选及其酶学性质研究

论文摘要

随着以淀粉质为原料的工业地发展,酸性α-淀粉酶的工业应用价值不断的受到人们的重视。而目前筛选出的酸性α-淀粉酶产生菌多为真菌,本课题旨在通过筛选得到一株产生酸性α-淀粉酶的细菌。本试验以淀粉厂污泥和醋厂醋渣作为含菌材料,通过在酸性培养基平板上进行初筛和复筛,筛选出了三株在酸性条件下有较强α-淀粉酶活力的菌株:B-1、B-5和B-6。测定三株菌粗酶液的最适pH,只有B-5的最适pH在酸性范围内,属于酸性α-淀粉酶。同时B-5粗酶液的生淀粉降解试验结果表明,它还具有一定的生淀粉酶活力。我们选择B-5进行进一步的研究。通过对B-5形态特征和生理生化特性的研究,初步鉴定其为浸麻芽孢杆菌（Bacteria . macerans）。B-5产生的酸性α-淀粉酶的酶学性质研究显示,该酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0,在pH4.0-6.0之间有很高的稳定性,但热稳定性不高。通过B-5粗酶液的酶谱分析我们发现,它只产生一型酸性α-淀粉酶。将粗酶液切胶纯化,由SDS-PAGE检测其纯度,证实该酶达到电泳均一纯,酶的分子量大约为46.7 kD。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 α-淀粉酶简介
• 1.2 特殊α-淀粉酶的研究开发
• 1.3 酸性α-淀粉酶的研究现状
• 1.3.1 酸性α-淀粉酶的产生菌株
• 1.3.2 酸性α-淀粉酶的组分差异
• 1.3.3 酸性α-淀粉酶的特性
• 1.3.4 酸性α-淀粉酶耐酸性机制
• 1.4 酸性α-淀粉酶的生产与应用
• 1.4.1 高产菌株的选育
• 1.4.2 发酵产酶
• 1.4.3 酸性α-淀粉酶的应用
• 1.5 生淀粉酶
• 1.5.1 生淀粉酶作用机制
• 1.5.2 生淀粉酶的发展前景
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 菌种来源
• 3.2 主要仪器及试剂
• 3.2.1 主要仪器
• 3.2.2 主要试剂
• 3.3 培养基
• 3.4 试验方法
• 3.4.1 酸性α-淀粉酶产生菌株的筛选
• 3.4.2 酸性α-淀粉酶的酶活力测定
• 3.4.3 生淀粉的降解
• 3.4.4 菌种鉴定试验
• 3.4.5 酶学性质的研究
• 3.4.6 粗酶液的α-淀粉酶酶谱检测
• 3.4.7 酶的纯化和纯酶的性质
• 4 结果与分析
• 4.1 酸性α-淀粉酶产生菌株的筛选
• 4.2 酶的最适pH及最适温度
• 4.2.1 酶反应最适 pH
• 4.2.2 酶反应的最适温度
• 4.3 生淀粉降解
• 4.3.1 生淀粉降解能力的比较
• 4.3.2 电子显微镜观察
• 4.4 B-5酸性α-淀粉酶的稳定性试验
• 4.4.1 酶的 pH 稳定性
• 4.4.2 酶的温度稳定性
• 4.5 菌种鉴定
• 4.5.1 菌落特征
• 4.5.2 菌体染色
• 4.5.3 生理生化试验
• 4.5.4 菌株鉴定结果
• 4.6 α-淀粉酶酶谱检测
• 4.7 酶的分子量
• 4.8 纯酶的性质
• 4.8.1 酶的最适 pH
• 4.8.2 酶的最适温度
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• ABSTRACT