肿瘤坏死因子受体—抗体融合蛋白对大鼠佐剂性关节炎及血清与滑膜中TNF-α、HIF-1α和VEGF表达的影响

论文摘要

目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种慢性进行性自身免疫性疾病,以关节滑膜炎,对称性和破坏性关节病变为主要特征。其病因尚不完全明确,多种免疫活性细胞的活化、细胞因子、炎症介质的共同参与、滑膜血管翳的发生和生长,是RA发生和发展的中心环节。并且促进了软骨和骨的破坏及关节重塑,最终造成关节畸形和强直,功能丧失。在细胞因子相互作用的网络中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）居于中心位置,是RA滑膜炎发生和持续的一个关键性因子。目前,改善症状的抗风湿药是RA的主要治疗手段,由于传统抗风湿药的毒副作用较大,因此,患者长期服用依从性差,不利于疾病控制。可溶性重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（rhu-TNFR-Fc,益赛普）,是一种拮抗TNF-α的生物制剂,目前已应用于临床:治疗效果优于传统的抗风湿药。但国内对于益赛普能否抑制促进血管增生的细胞因子的分泌罕有报道。本试验以佐剂诱导的关节炎大鼠模型为基础,从关节肿胀程度,血浆与滑膜组织中TNF-α及滑膜组织中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）浓度的变化,滑膜病理改变等几方面,观察益赛普对关节炎的影响,评价其疗效,探讨益赛普治疗RA的机制及临床应用价值。方法:（1）将成年雄性Wistar大鼠随机分为Ⅰ组（正常对照组）、Ⅱ组（单纯造模组）、Ⅲ组（造模+甲氨喋呤治疗组）、Ⅳ组（造模+益赛普低剂量治疗组）、Ⅴ组（造模+益赛普高剂量治疗组）。Ⅱ～Ⅴ组的尾根部皮下注射完全弗氏佐剂与卡介苗的乳化剂,诱导出关节炎模型。（2）从免疫后第12天开始Ⅲ组给予甲氨喋呤2.7mg/kg﹒w灌胃治疗,Ⅳ组给予益赛普0.44mg/kg﹒d皮下注射,Ⅴ组给予益赛普0.88mg/kg﹒d皮下注射治疗。（3）每三天测量各组大鼠的足体积（排水法）,并进行关节炎指数评定。（4）采用双抗体夹心ELISA法测定第28天各组大鼠血浆TNF-α浓度。（5）对各组大鼠滑膜组织进行TNF-α、VEGF、HIF-1α的sp免疫组织化学染色,采用真彩病理图像分析系统进行定量分析。（6）观察各组大鼠滑膜组织病理改变,并进行病理积分评定。（7）应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果:（1）关节炎指数（Arthritis Index ,AI）:第Ⅱ组大鼠造模后各时间点AI均高于第Ⅰ组（P<0.01）,高峰出现在造模后21～27天;Ⅴ组于造模后18～27天AI低于第Ⅱ组（P<0.05）;而Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组间AI无统计学差异。（2）足体积:第Ⅱ组大鼠造模后15天右后足体积高于第Ⅰ组（P<0.05）,第21～24天肿胀达到高峰,之后下降,第27天仍高于正常对照组（P<0.01）;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组于造模后第18～27天高于第Ⅰ组（P<0.05）;第Ⅳ组于第21～24天低于第Ⅱ组（P<0.05）,后渐升高,第27天与第Ⅱ组无统计学差异;第Ⅴ组于造模后第21～27天低于第Ⅱ组（P<0.01）。（3）血浆TNF-α浓度:第Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组血浆TNF-α水平均高于第Ⅰ组（P<0.05）;第Ⅰ、Ⅲ组无统计学差异;第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均低于第Ⅱ组（P<0.01）;第Ⅳ组高于第Ⅲ组（P<0.01）;第Ⅴ组与第Ⅲ组无统计学差异。（4）滑膜TNF-α、HIF-1α和VEGF的积分光密度（IOD）值及滑膜病理评分:①第Ⅱ组均显著高于第Ⅰ组,有统计学差异;②滑膜TNF-α的IOD值,Ⅳ、Ⅴ组均低于Ⅱ组,Ⅴ组低于Ⅳ组均有统计学意义,Ⅲ组明显高于Ⅳ、Ⅴ组（P<0.05）,而与第Ⅱ组无统计学差异;③滑膜HIF-1α、VEGF的IOD值,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均低于Ⅱ组有统计学意义,Ⅲ、Ⅳ组均高于Ⅴ组有统计学意义,而Ⅲ与Ⅳ组均无统计学差异;④滑膜病理评分,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均低于Ⅱ组有统计学意义,Ⅲ组明显高于Ⅴ组（P<0.05）,而Ⅲ、Ⅴ组与Ⅳ组无统计学差异。（5）相关性分析:AI与足体积成直线正相关;血浆TNF-α及滑膜中TNF-α、HIF-1α和VEGF水平分别成直线正相关,同时二者分别与足体积、病理积分成直线正相关。结论;（1）益赛普对AA大鼠的关节炎症有明显的治疗作用,可以降低AA大鼠的关节炎指数、足体积,减轻足肿胀程度。（2）益赛普可以有效抑制或延缓AA大鼠滑膜组织病理改变,可能能够控制病情进展。（3）对AA大鼠关节炎的治疗,益赛普高剂量的疗效优于MTX,低剂量与MTX相当,且对关节炎症的治疗作用存在剂量依赖性。（4）益赛普可降低AA大鼠血浆TNF-α的水平。（5）益赛普可明显降低AA大鼠滑膜组织TNF-α、HIF-1α和VEGF表达。（6） AI与足体积成直线正相关,均能反映关节肿胀情况,后者方法更为精确、客观。（7）造模后血浆TNF-α及滑膜TNF-α、HIF-1α和VEGF水平明显升高,并均与足体积、滑膜病理积分成正相关,提示这三种细胞因子在RA病理过程中发挥重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对大鼠佐剂性关节炎及血清与滑膜中TNF-α、HIF-1α 和 VEGF表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 类风湿关节炎与促血管新生的细胞因子
• 致谢
• 个人简历