灯盏花素、葛根素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-2的影响

论文摘要

目的:探讨灯盏花素及葛根素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs ）分泌基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的影响,为灯盏花素及葛根素在动脉粥样硬化疾病中的临床应用提供理论依据。方法:（1）用MTT法测定灯盏花素、葛根素对培养的HUVECs增殖影响的OD值,分别算出作用的半数抑制浓度（IC50）及10%的抑制浓度（IC10）;（2）分别采用三种浓度组的灯盏花素（17.5ug/ml、35ug/ml、70ug/ml）,葛根素（250 ug/ml、500 ug/ml、1000 ug/ml）对体外培养的人脐静脉内皮细胞进行干预,24小时后用培养细胞片免疫细胞化学染色的方法来分析两种药物不同浓度对人脐静脉内皮细胞分泌MMP-2的影响;（3）预先用不同浓度组的灯盏花素（17.5ug/ml、35ug/ml、70ug/ml）对贴壁的HUVECs进行干预,1小时后再加相同浓度的凝血酶（4U/ml）,设立凝血酶对照组（4U/ml）及空白对照组,24小时后用培养细胞片免疫细胞化学染色的方法来评价不同浓度的灯盏花素对HUVECs分泌MMP-2表达的情况。结果:（1）与对照组相比,灯盏花素在浓度≤78.125 ug/ml时,对HUVECs的增殖无影响（P>0.05）,而在156.25ug/ml,312.5ug/ml,625ug/ml,1250ug/ml浓度时明显抑制细胞增殖（P<0.01）;葛根素在浓度≤1250 ug/ml时,对HUVECs的增殖无影响（P>0.05）,而在2500ug/ml,5000ug/ml浓度时明显抑制细胞增殖（P<0.01）,48小时后灯盏花素对HUVECs作用的IC50为226.90ug/ml,IC10为73.99ug/ml;葛根素对HUVECs作用的IC50为8350.94ug/ml, IC10为1117.37 ug/ml。（2）与对照组相比,各浓度组灯盏花素对HUVECs分泌MMP-2的表达无影响（P>0.05）;葛根素组能促HUVECs分泌MMP-2,但250 ug/ml组与对照组相比有无差异（P>0.05）,500ug/ml及1000ug/ml组与对照组相比有显著差异（P<0.01）;（3）与凝血酶组相比,灯盏花素+凝血酶各组均能抑制凝血酶诱导的HUVECs分泌MMP-2（P<0.01）,35ug/ml与70ug/ml组灯盏花素相比对抑制凝血酶诱导的MMP-2的分泌无差异（P>0.05）。结论:（1）注射用灯盏花素在浓度≥156.25ug/ml及注射用葛根素在浓度≥2500ug/ml时对体外培养HUVECs的增殖均有抑制作用;（2）注射用葛根素能促体外培养的HUVECs分泌MMP-2,而注射用灯盏花素不能促体外培养的HUVECs分泌MMP-2;（3）注射用灯盏花素能部分抑制凝血酶诱导的体外培养的HUVECs分泌MMP-2。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验细胞
• 2.1.2 实验器材
• 2.1.3 实验试剂
• 2.1.4 实验用液体的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养
• 2.2.2 实验操作方法
• 2.3 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 倒置显微镜HUVECS 形态学观察
• 3.2 灯盏花素及葛根素对HUVECS 的增殖的影响
• 3.3 灯盏花素、葛根素对HUVECS 分泌MMP-2 的影响
• 3.4 灯盏花素不同浓度对凝血酶诱导HUVECS 分泌MMP-2 的影响
• 第4章 讨论
• 第5章 结论与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果