论文摘要
Kallikrein 是一类编码具有丝氨酸蛋白酶活性的基因家族,KLK6 是该家族成员之一。最近报道KLK6 基因在卵巢癌中可能具有疾病诊断与预后判定的潜在价值,还可能是有用的治疗靶点。本论文是想通过检测乳腺癌组织与正常组织及细胞中KLK6 的表达量的变化来探讨该基因在乳腺癌中的功能。目的:建立检测KLK6mRNA 表达的实时荧光定量PCR 的方法。分析KLK6mRNA的表达与乳腺癌有无转移、雌激素受体、孕激素受体、乳腺癌相关基因CerbB-2等临床病理特征的关系,探讨其临床意义。另外探讨乳腺癌细胞株MCF-7 中KLK6基因和蛋白质表达被干涉后细胞形态、细胞周期及细胞凋亡的变化。方法:采用实时荧光定量PCR 的方法,以SYBR Green I 为荧光染料、管家基因GAPDH 作为内对照、梯度稀释的重组质粒为模板制作标准曲线,绝对定量出33 例乳腺癌切除的组织中KLK6 基因mRNA 的表达量,分析KLK6mRNA 的表达量与ER、PR 及肿瘤转移的相关性。以体外化学合成的siRNA 干扰乳腺癌细胞株MCF-7 中KLK6 基因,分别用实时定量PCR 和流式细胞仪检测KLK6 基因mRNA 和蛋白质的干扰效果,结合细胞周期,细胞凋亡及细胞形态分析KLK6 在MCF-7 中的功能。结果:建立了KLK6 mRNA 实时荧光定量检测方法,该方法灵敏、特异,KLK6的批内变异系数为2.0%,批间变异系数为3.2%,扩增效率接近100%。KLK6 mRNA在癌组织中的表达水平（0.4327±0.2348）比正常组织（0.2194±0.1154）明显升高,两者差异非常显著（P<0.001）;有淋巴结转移病人癌组织中的表达水平（0.3096±0.1192）比未转移的（0.5527±0.2615）明显降低,两者差异显著（P<0.01）;ER（+）组（0.2811±0.1164）明显低于ER（-）组（0.5097±0.2521）,两者有显著性差异（P=0.005,P<0.01）;PR（+）中表达低（0.3673±0.2185）,PR（-）组表达高（0.4939±0.3425）,但两者的差异不明显（P>0.05）;与乳腺癌相关基因CerbB-2 的表达无相关性（P>0.05）。MCF-7 细胞中KLK6 基因表达沉默后,S 期细胞增加11.13%,细胞凋亡无明显变化。结论:KLK6 基因在早期乳腺癌病人高表达,在肿瘤进程中KLK6 的表达量下降并伴随肿瘤转移;在细胞株MCF-7 中KLK6 表达被干涉后,细胞的分裂增殖能力增
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