普瑞巴林结构确证及质量研究

论文摘要

普瑞巴林是一种新型γ-氨基丁酸（GABA）受体激动剂,用于治疗神经性疼痛,局部发作性癫痫和焦虑症。2004年12月美国食品与药品管理局（FDA）批准用于治疗糖尿病性周围神经病变的神经性疼痛和带状疱疹后遗神经痛。其作用机制是作为配体与α2-δ亚基结合,后者与电压依赖性钙通道有关,通过调节钙通道减少钙离子进入神经末梢,使几种兴奋性神经递质释放减少。在血中不与血浆蛋白结合,也无肝代谢,通过肾脏排泄,起效快,副作用小且时间短,多数病人可以耐受。普瑞巴林为S构型光学手性化合物,目前尚未在国内市场上市,也未被国内外药典收载。本文对重庆医药工业研究院试制的普瑞巴林（以下简称“本品”）进行系统的质量研究,为科学制定其质量控制标准提供了依据。重庆医药工业研究院采用自行设计的合成路线得到具有结晶形态的普瑞巴林,本文采用紫外（UV）、红外（IR）、质谱（MS）、核磁共振谱（H-NMR,C-NMR）等波谱技术确证了结构,以国外样品为对照通过HPLC柱前手性衍生化方法确定了其构型;并重点对本品的有关物质、光学异构体、残留溶剂和含量测定进行了系统的评价研究。有关物质测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Aichrombond AQ C18）,以磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钾0.12g、磷酸氢二钠0.56g,加水1000ml溶解）-乙腈（95:5）为流动相,检测波长为205nm,理论板数按普瑞巴林峰计算应不低于1500。该测定条件能与中间体,以及酸、碱、氧化破坏的的降解产物能完全分离。本品合成工艺中使用了二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、异丙醇、异戊醛、乙酸乙酯和丙二酸二乙酯。根据ICH（人用药物注册技术要求国际协调会）和中国药典的相关技术要求,采用气相色谱法进行了研究,各溶剂达到很好的分离,满足其残留溶剂的测定要求。利用Na-（5-氟-2,4-二硝基苯基）-L-丙胺酰胺（FDNPAA）为柱前手性衍生化试剂,该试剂的摩尔比在2.96以上与普瑞巴林可定量反应生成的化合物可用普通色谱柱分离测定普瑞巴林中的光学异构体。最佳色谱条件为Inertsil ODS-2柱（5μm,250mmx4.6mm）,流动相为三乙胺缓冲液（取三乙胺7.0ml,加水1000ml,用磷酸溶液调节pH值至3.0）-乙腈（55:45,V/V）,紫外检测波长为340nm。普瑞巴林光学异构体衍生物的色谱峰分离度大于4、最小检测限为3.79x10-8g/ml（S/N=3）,该法准确、可靠,适用于普瑞巴林或普瑞巴林制剂的质量控制。含量测定用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Aichrombond AQ C18）,以磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钾0.12g、磷酸氢二钠0.56g,加水1000ml溶解）-乙腈（95:5）为流动相,检测波长为205nm。建立了普瑞巴林含量的测定方法,所建立的检查方法具有良好的专属性,最小检出浓度为1.890×10-7（g/ml） ,在0.20821.6656mg/ml的范围内线性关系良好,线性方程为A=1730.20C+4.608（其中:A-HPLC图中主峰峰面积,C-样品溶液浓度）,相关系数为1.0。方法精密度RSD为0.3%。在以上研究的基础上,制定了符合相关技术要求的普瑞巴林临床用药质量标准。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪言
• 1.1 普瑞巴林概况
• 1.2 本文研究内容及目的
• 2 普瑞巴林结构确证
• 2.1 名称、化学结构、分子式、分子量
• 2.2 对照品的纯度及检测结果
• 2.3 确证化学结构的方法
• 2.3.1 元素分析
• 2.3.2 紫外光谱
• 2.3.3 红外吸收光谱（IR）
• 2.3.4 核磁共振谱
• 2.3.5 质谱
• 2.3.6 热分析
• 2.3.7 粉未X-射线衍射仪
• 2.3.8 构型的确认
• 2.4 综合解析结论
• 3 普瑞巴林有关物质测定
• 3.1 有关物质测定色谱条件的选择
• 3.1.1 HPLC 法采用蒸发光散色检测器（ELSD）
• 3.1.2 HPLC 法采用紫外检测器（UVD）
• 3.2 色谱系统的专属性研究
• 3.2.1 进样量的确定
• 3.2.2 色谱系统最小检测量
• 3.2.3 色谱系统对普瑞巴林的分离及色谱收集时间
• 3.2.4 色谱系统对普瑞巴林成品中可能带入的中间体及反应原料的分离
• 3.2.5 色谱系统对降解产物的分离
• 3.2.6 色谱峰的纯度
• 3.3 有关物质测定的线性试验
• 3.4 有关物质测定溶液的稳定性
• 3.5 （S）-（+）-苯乙醇酸（即扁桃酸）的测定
• 3.5.1 测定色谱条件
• 3.5.2 （S）-（+）-苯乙醇酸与普瑞巴林的分离度
• 3.5.3 （S）-（+）-苯乙醇酸检测限
• 3.5.4 （S）-（+）-苯乙醇酸测定的线性关系
• 3.5.5 （S）-（+）-苯乙醇酸测定溶液的稳定性
• 3.6 色谱系统对普瑞巴林有关物质的测定法及测定结果
• 4 普瑞巴林光学异构体测定
• 4.1 手性色谱柱分离法研究
• 4.1.1 冠醚类手性色谱柱
• 4.1.2 其他手性色谱柱分离
• 4.2 化学衍生化法
• 4.2.1 仪器及测试条件
• 4.2.2 衍生化机理
• 4.2.3 衍生化方法
• 4.2.4 衍生化试剂用量的研究
• 4.2.5 衍生化反应时间的确证
• 4.2.6 衍生化后测定溶液的稳定性
• 4.2.7 系统适用性试验
• 4.2.8 普瑞巴林衍生物与普瑞巴林R 型异构体衍生物相对保留时间
• 4.2.9 最小检测量
• 4.2.10 异构体的检出线性范围
• 4.2.11 光学异构体测定波长
• 4.2.12 衍生物色谱峰纯度
• 4.3 光学异构体测定方法及结果
• 4.4 国外样品的光学异构体测定结果
• 5 普瑞巴林残留溶剂
• 5.1 色谱条件和系统适用性试验
• 5.1.1 色谱条件
• 5.1.2 溶液的配制及测定法
• 5.1.3 测定法
• 5.2 最小检测量
• 5.3 各主峰间的分离度
• 5.4 测定方法的平行试验
• 5.5 多批样品测定结果
• 6 普瑞巴林含量测定
• 6.1 色谱条件及仪器
• 6.2 测定方法
• 6.3 线性范围
• 6.4 测定液的稳定性
• 6.5 方法的精密度
• 6.6 检测限和定量限
• 6.7 样品测定结果
• 7 理化常数、鉴别与一般杂质检查
• 7.1 理化常数
• 7.1.1 外观、臭
• 7.1.2 溶解度
• 7.1.3 熔点
• 7.1.4 比旋度
• 7.2 鉴别
• 7.2.1 显色反应
• 7.2.2 高效液相色谱法鉴别
• 7.2.3 红外光吸收图谱
• 7.3 检查
• 7.3.1 酸碱度
• 7.3.2 干燥失重
• 7.3.3 炽灼残渣
• 7.3.4 重金属
• 7.3.5 砷盐
• 7.3.6 氯化物
• 7.3.7 溴
• 7.3.8 硫酸盐
• 7.4 研究小结
• 8 普瑞巴林研究结论
• 8.1 研究总结
• 8.2 普瑞巴林质量标准
• 8.3 质量标准起草说明
• 8.3.1 性状
• 8.3.2 鉴别
• 8.3.3 检查
• 8.3.4 含量测定
• 8.3.5 类别抗癫痫药
• 8.3.6 贮藏
• 致谢
• 参考文献