SD大鼠肝细胞、Kupffer细胞分离与培养/共同培养的实验研究

论文摘要

[目的]建立稳定高效分离SD大鼠肝细胞与Kupffer细胞的实验流程,研究SD大鼠Kupffer细胞与肝实质细胞共同培养时Kupffer细胞对肝实质细胞生长、形态功能的影响,为体外原代培养肝细胞的应用及进行相关研究提供参考数据。 [方法](1)原位二步Ⅳ型胶原灌注法消化SD大鼠的肝脏;(2)低速离心法分离肝实质细胞;(3)Percoll液密度梯度离心法分离肝Kupffer细胞;(4)单独培养肝实质细胞:以6:1比例贴壁共培养肝实质细胞与Kupffer细胞;(5)光镜分别观察单独培养与共同培养情况下肝实质细胞的生存和形态;(6)全自动生化仪检测单独与共同培养情况下培养上清白蛋白和糖水平并进行比较。 [结果]每只大鼠可分离的肝细胞产量平均为(2.03±0.26)×10~8,细胞活力为88—95%,平均(91.7±2..1)%。Kupffer细胞产量平均为(3.19±0.20)×10~7,纯度为85—92%,平均(88.5±1.83)%。192小时原代贴壁培养观察,单独培养组肝细胞的生长、增殖迅速,并向正常肝细胞的形态演变。2周后细胞开始死亡,培养至21天时细胞全部死亡。共同培养组肝细胞于48h即开始出现少量的死亡细胞,细胞生长增值缓慢,细胞培养至10天时细胞全部死亡。 单独培养组上清白蛋白水平在48h、96h、120h、144h、168h比混合培养组高(分别为1.722±0.123vs1.640±0.127,1.808±0.097vs1.580±0.084,1.680±0.070 vs 1.540±0.085,1.850±0.082 vs 1.720±0.042,1.644±0.067 vs 1.525±0.035经两样本均数t检验,p<0.05);在72h和192h两个培养时点两组白蛋白合成水平无显著差异(分别为1.648±0.049vs1.650±0.141,1.650±0.045vs1.650±0.028,经两样本均数t检验,p>0.05)。单独培养组上清糖水平在96h、144h、168h高于混合培养组(分别为10.33±0.350vs9.60±0.300,9.51±0.221vs8.85±0.025,9.38±0.198vs8.72±0.339,经两样本均数t检验,p<0.05),其他时点无显著差异(分别为8.81±0.154vs8.73±0.224,9.92±

论文目录

• 一、SD大鼠肝细胞、Kupffer细胞分离与培养／共同培养的实验研究
• 1、中文摘要
• 2、英文摘要
• 3、前言
• 4、材料与方法
• 5、结果
• 6、讨论
• 7、结论
• 8、参考文献
• 二、致谢
• 三、生物人工肝细胞培养研究进展（综述）