蛋白酶体亚基PSMA7在结直肠癌中的表达及其功能研究

论文摘要

蛋白酶体亚基PSMA7参与组成20S蛋白酶体核心复合体,其编码基因定位于20q13.33染色体。有报道在不同肿瘤中发现PSMA7的表达上调,一些研究表明PSMA7参与了多种重要的肿瘤相关蛋白的表达及活性调节,但PSMA7本身在肿瘤的发生发展中的作用尚未明确。目的:1.探讨PSMA7在结直肠癌组织中的表达情况及其与各临床病理因素的相关性。2.构建PSMA7 shRNA表达质粒,评价其RNA干扰的有效性。3.探讨PSMA7在结直肠癌发生发展中的作用及可能的分子机制。材料与方法:1.采用半定量RT-PCR方法检测32对结直肠癌组织及其对应正常组织中的PSMA7 mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测62例结直肠癌原发灶、34例淋巴结转移灶和13例行手术切除的肝转移灶组织中PSMA7的蛋白表达情况,与对应的正常组织进行比较,并分析结直肠癌原发灶组织PSMA7蛋白的表达水平与结直肠癌不同临床病理因素的相关性。2.构建PSMA7 shRNA表达质粒,通过脂质体Lipofectamine 2000介导转染结直肠癌RKO细胞,并通过蛋白免疫印迹验证RNA干扰的有效性。3.对PSMA7 shRNA转染RKO细胞和对照细胞进行细胞表型的对比研究,包括细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、非锚定生长能力、迁移侵袭能力、细胞肌动蛋白骨架和裸鼠皮下移植瘤生长情况的检测;通过RT-PCR检测基质金属蛋白酶（MMP）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）的表达,通过RT-PCR和蛋白免疫印迹检测CD44mRNA和CD44蛋白的表达。结果:1.PSMA7在结直肠癌原发灶、淋巴结转移灶和肝转移灶组织中的表达高于对应的正常组织,结直肠癌原发灶组织的PSMA7表达与肝转移密切相关,结直肠癌原发灶PSMA7高表达患者的生存率明显低于低表达患者,生存率多因素分析显示结直肠癌原发灶组织PSMA7的表达为独立预后因素。2.成功构建PSMA7 shRNA表达质粒,转染RKO细胞,并筛选出PSMA7 shRNA表达克隆,蛋白免疫印迹检测表明PSMA7 shRNA转染明显下调PSMA7的蛋白表达。3.PSMA7 shRNA转染RKO细胞和对照细胞的对比研究结果表明:PSMA7 shRNA转染对RKO细胞的增殖、凋亡和细胞周期无明显影响,但可以影响细胞形态,抑制RKO细胞的非锚定生长能力和迁移侵袭能力,影响肌动蛋白细胞骨架的组装,抑制RKO细胞在裸鼠体内的成瘤能力。RT-PCR检测表明PSMA7 shRNA转染不影响MMP和TIMP的表达,RT-PCR和蛋白免疫印迹检测表明PSMA7 shRNA转染抑制CD44的表达。结论:PSMA7在结直肠癌组织中高表达,其表达与肝转移密切相关,是结直肠癌患者独立预后因素。通过构建PSMA7 shRNA表达质粒和脂质体介导转染RKO细胞成功实施RNAi,进行PSMA7的功能研究结果表明:PSMA7shRNA转染可以影响RKO细胞的细胞形态,抑制其非锚定生长能力和迁移侵袭能力,影响肌动蛋白细胞骨架的组装,抑制RKO细胞在裸鼠体内的成瘤能力,提示我们PSMA7可能在结直肠癌的进展中发挥重要作用。PSMA7作用分子机制初步研究结果表明:PSMA7 shRNA转染抑制RKO细胞CD44的表达,调控CD44的表达可能是PSMA7的部分作用机制。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 缩略语及中英文对照
• 正文
• 1 引言
• 2 正文
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 参考文献
• 综述
• 作者简历