慢病毒介导的生长抑素siRNA对小鼠生长轴激素的影响

论文摘要

本研究将具有高效感染和基因组整合特性的慢病毒载体和RNA干扰结合,研究其对哺乳动物细胞中SS的抑制作用,探索SS基因的沉默对细胞以及小鼠生长轴激素的影响。首先通过质粒转染BHK-21细胞,筛选出了最有效的靶向SS的shRNA（SS 433-451,sh2）。将筛选出的psh2包装并浓缩产生高滴度的病毒液（6×108 ifu/mL）,感染BHK-21和MFC细胞。结果表明慢病毒对贴壁及难转染的悬浮细胞均获得了高效的siRNA基因转移和表达效率,并且对内源性SS的基因表达发挥了显著的抑制作用。揭示了SS对正常细胞和肿瘤细胞均有抑制增殖作用,其对正常细胞的抑制增殖作用是通过诱导细胞凋亡发生的。本研究为SS作为治疗药物的开发应用提供了理论依据。最后,基于下丘脑SS的主要功能是抑制垂体GH分泌,本研究采用小鼠脑定位注射的办法,在活体内探讨慢病毒介导SS-siRNA对下丘脑SS的表达下调及GH/IGF-1轴相关因子的变化。结果表明,慢病毒有效的感染了下丘脑SS神经元细胞,并高效表达siRNA,发挥其对目标基因SS稳定的沉默作用。同时,揭示了下丘脑SS对垂体GH的抑制作用,SSTR 2和5是其中起关键作用的SSTRs。本研究首次采用慢病毒介导SS-shRNA沉默了内源性SS的表达,为动物生长调控的研究打下了基础,为研究其他脑内激素的作用机制建立了新的方法和途径。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 生长抑素对神经内分泌生长轴的作用
• 1.1 SS 的发现和化学结构
• 1.2 SS 的基因及基因调节
• 1.3 SS 的分布及代谢
• 1.4 SS 的受体
• 1.5 SS 的作用
• 1.6 SS 在动物生产中的应用
• 第2章 慢病毒载体介导的RNA干扰研究进展
• 2.1 RNA 干扰
• 2.2 慢病毒表达载体
• 2.3 慢病毒载体介导的RNA 干扰
• 第二篇 研究内容
• 第1章 生长抑素SS shRNA的设计与质粒构建
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 第2章 生长抑素（SS）shRNA的筛选
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第3章 慢病毒介导的SS-shRNA病毒包装及对细胞的效应
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第4章 慢病毒介导的SS-shRNA对小鼠神经内分泌生长轴的影响
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的学术论文及其它成果
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract
• 导师及作者简介
• Curriculum vitae