吗啡依赖大鼠海马、纹状体及皮层组织的蛋白质组分析

论文摘要

越来越多的观点认为阿片依赖的神经生物学基础是神经元的代偿性适应,这种适应性改变涉及很多脑区及许多分子。目前为止,与阿片依赖相关的差异蛋白质表达谱的研究尚未见报道。本研究的目的是用蛋白质组学技术在海马、纹状体及皮层脑区寻找与阿片依赖相关的差异表达的蛋白质。采用吗啡递增给药法建立吗啡依赖模型,用纳洛酮催促后出现典型的戒断症状,以盐水组为对照,对长期接受吗啡处理和纳洛酮催促戒断这2种状态的大鼠海马、纹状体及皮层组织进行了比较蛋白质组研究,通过凝胶图像分析和统计学分析,确定了与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点,这些点分布在pI 5～8、分子量17.0 kDa～65.0 kDa的范围内,表达量上调最大达5.1倍,下调最低至0.2倍;经胶内酶切,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术和电喷雾电离串联质谱技术,鉴定了对应于二维凝胶上50个差异点的38个差异蛋白质,其中有25个差异蛋白质以前未见与阿片依赖相关的报道。这些蛋白质具有不同的细胞功能和突触功能,有一些蛋白质与神经元的可塑性高度相关。有两个蛋白质以N端发生了乙酰化修饰的形式存在,这两种蛋白质N端乙酰化形式的存在以前未见报道。这些结果为深入研究阿片依赖的神经生物学机制提供了全新的线索。

论文目录

• 缩略词索引
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 一.材料
• 1.试剂
• 2.标本来源
• 3.主要仪器设备
• 二.实验方法
• 1.试剂配制
• 2.吗啡依赖模型的建立
• 3.双向电泳蛋白质样品制备
• 4.双向电泳
• 5.染色
• 6.凝胶图像采集与分析
• 7.差异表达蛋白质点的质谱鉴定
• 结果
• 一.吗啡依赖的行为学评价
• 二.二维凝胶电泳图像分析和统计学分析
• 1.海马组织中与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点
• 2.纹状体组织中与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点
• 3.皮层组织中与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点
• 4.组织特异性的与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点
• 5.组织非特异性的与吗啡依赖相关的差异蛋白质斑点
• 三.与吗啡依赖相关的差异蛋白质的鉴定
• 四.鉴定蛋白质的功能分类
• 五.与吗啡依赖相关的两个差异蛋白质N端乙酰化修饰的鉴定
• 讨论
• 一.吗啡依赖形成过程中突触功能和形态的可塑性
• 二.电压依赖性阴离子通道1（VDAC 1）和G蛋白β1亚基在吗啡依赖中的效应及它们的N端乙酰化修饰
• 1.VDAC 1在吗啡依赖中的效应
• 2.G蛋白β1亚基在吗啡依赖中的效应
• 3.VDAC 1和G蛋白β1亚基的N端乙酰化修饰
• 三.吗啡依赖形成过程中的神经元损伤和凋亡
• 四.吗啡依赖的组织特异性
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 在读期间发表的文章
• 综述