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NCCN推荐流程（V.1.2006）筛查国人遗传性非息肉病性结直肠癌的临床价值及其分子生物学基础

2020-11-29阅读(331)

NCCN推荐流程（V.1.2006）筛查国人遗传性非息肉病性结直肠癌的临床价值及其分子生物学基础

论文摘要

背景:结直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,遗传性非息肉病性结直肠癌（Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer, HNPCC）在遗传性结直肠癌中占很大比例,约占结直肠癌总数的5%-10%。HNPCC为常染色体显性遗传疾病,多具有错配修复（mismatch repair, MMR）基因的突变,而家族内具有此突变基因的成员一生中患结直肠癌或其它肠道外相关肿瘤的风险约为80%。1999年由HNPCC国际协作组（ICG-HNPCC）提出的《Amsterdam II criteria》是传统的诊断标准。但是由于我国计划生育的政策,可能由于家系内成员数量不足而无法满足上述标准。美国国家综合癌症网（National Comprehensive Cancer Network,NCCN）提出了新的筛选流程来筛选HNPCC患者,首先应用筛选标准《Revised Bethesda Guidelines》进行临床病例的筛选,然后通过免疫组织化学和基因测序的方法来诊断HNPCC患者。近期发现,错配修复基因MSH2不仅是错配修复过程的重要成员,还参与细胞的增殖、细胞周期调控和细胞凋亡。目的:研究NCCN推荐流程（V.1.2006）筛选国人HNPCC的临床应用价值及分子生物学基础;分析错配修复蛋白（MSH2和MLH1）在结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系;探讨HNPCC的分子生物学基础。材料与方法:一、材料:北京大学人民医院胃肠外科2002年1月至2006年2月经手术治疗的结直肠癌患者419例。二、方法:1.应用NCCN推荐流程（V.1.2006）筛查国人HNPCC患者:（1）应用《Revised Bethesda Guidelines》进行筛选。（2）免疫组织化学法（EnVision二步法）检测结直肠癌组织石蜡切片中错配修复蛋白MLH1和MSH2表达情况（错配修复蛋白缺失者为HNPCC患者）。（3）错配修复蛋白表达缺失者,应用RT-PCR及突变检测MLH1或MSH2突变（4）错配修复蛋白表达正常者,应用《Amsterdam II criteria》进行补充诊断（符合《Amsterdam II criteria》患者为HNPCC）。2.应用《Amsterdam II criteria》筛查国人HNPCC患者3.分析错配修复蛋白表达与结直肠癌患者临床病理指标和预后之间的关系。4.敲减人结肠癌细胞系SW480的错配修复基因MSH2的表达,建立模拟HNPCC细胞模型。5.四唑盐（MTT）比色法,流式细胞术和Transwell法研究小干扰RNA（SiRNA）敲减MSH2基因对结肠癌细胞系SW480增殖,细胞周期与细胞侵袭力的影响。结果:1. NCCN推荐流程（V.1.2006）筛查HNPCC患者21名（1）419例结肠癌患者中有90例患者符合《Revised Bethesda Guidelines》。（2）免疫组织化学法检测到18例患者存在MLH1或MSH2蛋白表达缺失。（3）错配修复蛋白缺失者中,检测到基因突变3例。（4）错配修复蛋白正常者中,《Amsterdam II criteria》补充诊断HNPCC患者3例。（5）NCCN推荐流程（V.1.2006）筛查HNPCC患者21例（错配修复蛋白缺失患者18名+《Amsterdam II criteria》补充诊断3名）2.单纯应用《Amsterdam II criteria》筛查HNPCC患者8名,较NCCN推荐流程少诊断HNPCC患者13名。3.错配修复蛋白表达与肿瘤位置、淋巴结转移情况和肿瘤大小有关,可能是患者预后影响因素之一。4.应用SiRNA敲减MSH2基因,建立MSH2低表达的SW480结肠癌细胞,可能成为模拟HNPCC的细胞模型。5.SiRNA敲减MSH2基因的SW480结肠癌细胞增殖减慢,细胞周期阻滞于G1期,细胞侵袭能力下降。结论:（1）NCCN推荐流程（V.1.2006）可以有效筛查国人HNPCC患者,减少漏诊率,具有良好的临床应用价值。（2）敲减错配修复基因MSH2在结肠癌细胞中的表达可降低结肠癌细胞的增殖和侵袭。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要（ABSTRACT）
  • 文献综述
  • 引言
  • 第一章 遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）的概述
  • 第一节 HNPCC 的临床特点
  • 第二节 HNPCC 的临床筛选标准
  • 第三节 HNPCC 的分子诊断方法
  • 一、免疫组织化学染色的临床应用
  • 二、微卫星不稳定检测
  • 三、错配修复基因突变检测
  • 1. 错配修复基因DNA 直接突变检测
  • 2. 多重连接依赖的探针扩增技术（MLPA）
  • 3. 基因转变分析（conversion analysis）
  • 第四节 HNPCC 的鉴别诊断
  • 第五节 HNPCC 的预后
  • 第二章 HNPCC 的发病机制
  • 第一节 错配修复基因与HNPCC
  • 一、错配修复基因成员
  • 二、错配修复基因的功能
  • 1. 错配修复基因与碱基错配修复
  • 2. 错配修复基因与增殖
  • 3. 错配修复基因与细胞凋亡
  • 4. 错配修复基因与细胞周期调控
  • 三、HNPCC 相关的错配修复基因
  • 1. MSH2 基因
  • 2. MLH1 基因
  • 3. MSH6 基因
  • 4. PMS1 基因和PMS2 基因
  • 第二节 微卫星不稳定性与HNPCC
  • 一、微卫星不稳定性概述
  • 二、微卫星不稳定性在散发性结直肠癌中的作用机制
  • 三、微卫星不稳定性相关基因在HNPCC 中的作用
  • 1. 信号转导基因
  • 2. 凋亡和炎症相关基因
  • 3. 转录调节因子基因
  • 4. DNA 修复基因
  • 四、微卫星不稳定性的检测
  • 1. 凝胶电泳法
  • 2. 基因扫描法
  • 3. 变性高效液相色谱分析（DHPLC）
  • 第三章 HNPCC 的治疗和预防
  • 第一节 HNPCC 家系中结直肠癌的手术治疗
  • 第二节 HNPCC 的辅助治疗
  • 第三节 HNPCC 的预防
  • 一、改变生活方式预防
  • 二、化学药物预防
  • 三、手术预防
  • 1. 预防性结肠切除术
  • 2. 预防性子宫及双侧附件切除术
  • 第四节 HNPCC 的随访
  • 论文
  • 前言
  • 第一章 NCCN 推荐流程（V.1.2006）筛查国人HNPCC 的临床价值
  • 第一节 材料
  • 一、研究对象
  • 二、组织标本的采集与存放
  • 三、试剂
  • 四、设备
  • 第二节 方法
  • 一、NCCN 推荐流程（V.1.2006）筛查国人HNPCC 患者
  • 1. 《Revised Bethesda Guidelines》筛选结直肠癌患者
  • 2. 免疫组织化学法检测结直肠癌组织中MSH2 和MLH1 表达
  • 3. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及测序检测错配修复基因突变..
  • 4. 错配修复蛋白表达正常者，应用《Amsterdam II criteria》进行补充诊断
  • 二、《Amsterdam II criteria》筛查国人HNPCC 患者
  • 第三节 结果
  • 一、NCCN 推荐流程（V.1.2006）筛查国人HNPCC 患者21 名
  • 1. 《Revised Bethesda Guidelines》筛选结直肠癌患者
  • 2. 免疫组织化学法检测错配修复蛋白MLH1 和MSH2 表达
  • 3. RT-PCR 扩增MLH1 和MSH2 基因及突变检测
  • 4. 错配修复蛋白表达正常而符合《Amsterdam II criteria》患者3 例
  • 5. NCCN 推荐流程（V.1.2006）筛查国人HNPCC 患者结果
  • 二、《Amsterdam II criteria》筛查国人HNPCC 患者8 名
  • 第二章 错配修复蛋白表达与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系
  • 第一节 材料及方法
  • 一、试验材料及方法详见第一章
  • 二、临床病理资料及评估方法
  • 三、统计学方法
  • 第二节 结果
  • 一、错配修复蛋白表达与肿瘤位置
  • 二、错配修复蛋白表达与淋巴结转移
  • 三、错配修复蛋白表达与肿瘤最大直径
  • 四、错配修复蛋白表达与其它临床病理指标的关系
  • 五、错配修复蛋白表达与肿瘤患者的生存情况
  • 第三章 NCCN 推荐流程（V.1.2006）筛查HNPCC 的分子生物学基础
  • 第一节 材料
  • 一、RNA 干扰慢病毒载体及细胞系
  • 二、仪器
  • 三、试剂
  • 第二节 方法
  • 一、MSH2 小干扰RNA（MSH2-SiRNA）的设计和筛选
  • 二、MSH2-SiRNA 敲减结肠癌细胞MSH2 基因表达以建立模拟HNPCC 细胞模型
  • 三、敲减MSH2 基因对SW480 结肠癌细胞生物学特性的影响
  • 1. SW480 细胞增殖检测（四唑盐比色法）
  • 2. SW480 细胞周期检测（流式细胞术）
  • 3. SW480 细胞侵袭转移行为检测（Transwell 法）
  • 第三节 结果
  • 一、MSH2 小干扰RNA（MSH2-SiRNA）的设计和筛选
  • 二、MSH2-SiRNA 敲减结肠癌细胞MSH2 基因以建立模拟HNPCC 细胞模型.
  • 三、敲减MSH2 基因对结肠癌细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭的影响
  • 1. MSH2-SiRNA 敲减MSH2 基因后结肠癌细胞增殖受到抑制
  • 2. MSH2-SiRNA 敲减MSH2 基因后结肠癌细胞周期阻滞于G0/G1 期
  • 3. MSH2-SiRNA 敲减MSH2 基因后结肠癌细胞侵袭转移能力下降
  • 第四章 讨论
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 缩写词表
  • 致谢
  • 个人简历

    • 相关论文文献

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