论文摘要
第一部分TNF-α和IL-1β对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白-A表达水平的影响目的研究TNF-α和IL-1β对原代培养的大鼠主动脉内皮细胞妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）表达水平的影响。方法采用贴块法原代培养大鼠主动脉内皮细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过Ⅷ因子免疫荧光法对培养的细胞进行鉴定。选择生长良好的第3-4代细胞用于实验。研究对象随机分为5组:（1）空白对照组:不加干预的DMEM培养基;（2）TNF-α浓度组:培养基中加入不同浓度的TNF-α（10、20、40、60、100ng/ml ）培养细胞24h;（3）IL-1β浓度组:培养基中加入不同浓度的IL-1β（1、5、10、20、50 ng/ml）培养细胞24h;（4）TNF-α时间组:培养基中加入浓度为60ng/ml的TNF-α,培养不同的时间（2、4、8、16、24、48h）;（5）IL-1β时间组:培养基中加入浓度为20ng/ml的IL-1β,培养不同的时间（2、4、8、16、24、48h）。经药物干预后收集细胞及培养上清液,采用LDH试剂盒检测各组培养上清液中LDH的活性,采用RT-PCR技术测定细胞中PAPP-AmRNA的表达,用ELISA方法检测上清液中PAPP-A蛋白水平。结果1.在倒置相差显微镜下观察,正常细胞生长良好,呈扁平多角形,边界清楚,胞质丰富,核圆形或椭圆形,居中,偶见双核,随细胞密度增加呈现“铺路石样”排列;荧光显微镜下可见细胞胞浆内均呈现绿色荧光,即胞浆内表达Ⅷ因子,符合内皮细胞特征。2.上清液LDH活性检测结果显示,TNF-α100ng/ml组（115.42±12.17）和IL-1β50ng/ml组（121.49±10.12）显著高于空白对照组（78.57±10.85）（P<0.05）,其余实验组与空白对照组的LDH活性无统计学差异（P>0.05）。说明100ng/ml TNF-α和50ng/ml IL-1β对细胞有毒性作用。（后续实验时,排除这两组。）3.不同浓度TNF-α（10、20、40、60ng/ml）和IL-1β（5、10、20ng/ml）作用24小时后,大鼠内皮细胞PAPP-AmRNA及上清液中PAPP-A蛋白表达水平随TNF-α和IL-1β浓度的增加而升高（p<0.05）,炎症因子与内皮细胞PAPP-A表达水平有剂量-效应关系,呈剂量依赖性。4. TNF-α60ng/ml作用于大鼠内皮细胞不同时间,4、8、16、24、48小时组PAPP-A表达水平显著高于空白对照组（p<0.05）,随刺激时间的延长,PAPP-A的表达逐渐升高,呈时间依赖性。IL-1β20ng/ml作用于内皮细胞不同时间,PAPP-A的表达也随时间的延长而升高,与空白对照组有显著差异（p<0.05）,这种时间依赖性变化从8小时开始出现。第二部分阿托伐他汀对TNF-α和IL-1β诱导PAPP-A表达的影响目的研究阿托伐他汀对炎症因子TNF-α和IL-1β诱导内皮细胞PAPP-A表达的影响。方法研究对象随机分为5组:（1）空白对照组:不加干预的DMEM培养基;（2）TNF-α组:培养基中加入浓度为60 ng/ml的TNF-α,培养细胞24h;（3）IL-1β组:培养基中加入浓度为20 ng/ml的IL-1β,培养细胞24h;（4）阿托伐他汀组:培养基中加入浓度为10μmol/L的阿托伐他汀,培养细胞24h;（5）阿托伐他汀干预组:培养基中加入TNF-α（60ng/ml）或IL-1β（20ng/ml）,同时加入不同浓度的阿托伐他汀（0.05, 0.1, 1.0, 10μmol/L）,培养24h后收集细胞。MTT法观察药物阿托伐他汀对细胞增殖的影响,RT-PCR技术测定细胞中PAPP-AmRNA的表达,ELISA方法检测上清液中PAPP-A蛋白水平。结果1.外源性加入不同浓度的阿托伐他汀后,分别作用3、6、12、24、48h,同对照组相比,细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）。说明干预药物本身对细胞没有毒性作用。2.阿托伐他汀组PAPP-A表达水平与空白对照组比较没有明显差异（P>0.05）。3.阿托伐他汀干预组PAPP-AmRNA和蛋白表达水平,随着阿托伐他汀浓度的增加而逐渐降低,有一定的浓度依赖关系,与TNF-α组和IL-1β组比较明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.炎症因子TNF-α和IL-1β呈剂量依赖性和时间依赖性的上调内皮细胞PAPP-A的表达。2.阿托伐他汀本身对细胞表达PAPP-A没有影响,但在一定程度上可抑制TNF-α和IL-1β诱导的内皮细胞PAPP-A表达的上调,并具有浓度依赖关系。
论文目录
相关论文文献
- [1].IL-1β促进肺鳞癌细胞增殖的机制研究[J]. 安徽医科大学学报 2020(02)
- [2].骨髓间充质干细胞对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的抑制作用及其机制[J]. 山西医科大学学报 2020(05)
- [3].丁苯酞对急性脑梗死患者血清IL-1β水平的影响[J]. 淮海医药 2020(03)
- [4].阿霉素促进心脏成纤维细胞分泌IL-1β和Ⅰ型胶原蛋白的机制研究[J]. 中国病理生理杂志 2020(09)
- [5].隐性乳房炎病牛乳清中IL-1β及IL-6变化研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2017(02)
- [6].IL-1β基因-31T/C多态性与川崎病的关联性[J]. 中南大学学报(医学版) 2017(01)
- [7].IL-1及家族成员在心肌炎中的作用研究[J]. 现代生物医学进展 2016(35)
- [8].IL-1β在溃疡性结肠炎中的表达及意义[J]. 南通大学学报(医学版) 2016(05)
- [9].IL-1β、IL-6和IL-18在颅脑损伤患者中的表达及其临床意义[J]. 检验医学与临床 2017(07)
- [10].维生素D联合抗结核药物对老年脊柱结核患者血清IL-1β及干扰素γ水平的影响[J]. 现代生物医学进展 2017(09)
- [11].依达拉奉治疗出血性脑梗死的疗效及其对IL-1β和IL-6的影响[J]. 血栓与止血学 2017(04)
- [12].IL-1β与IL-18在急性肺损伤中的表达及临床意义[J]. 海南医学 2017(12)
- [13].急性小脑出血患者失眠与出血部位、神经损伤程度和IL-1β浓度的关系[J]. 海南医学 2017(16)
- [14].双醋瑞因对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用[J]. 中国现代应用药学 2015(12)
- [15].血清IL-1β及脑源性神经营养因子检测在双相情感障碍患者中的应用[J]. 国际检验医学杂志 2016(14)
- [16].IL-1β及BDNF水平变化与高血压脑出血患者脑水肿的关系[J]. 现代生物医学进展 2016(31)
- [17].清瘀汤对股骨颈骨折人工股骨头置换术后IL-1、IL-6及C-反应蛋白的影响[J]. 中医药导报 2015(03)
- [18].阳和汤对急性乳腺炎患者血清IL-1α、IL-6的影响[J]. 辽宁中医杂志 2015(04)
- [19].IL-1β和IL-6在结直肠癌患者中的表达及意义[J]. 河北医药 2015(18)
- [20].荔枝核皂苷对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6、IL-1β的影响[J]. 时珍国医国药 2015(09)
- [21].血清IL-1β、IL-10、MCP-1水平变化对霍奇金淋巴瘤患者早期诊断和疗效预测的价值[J]. 现代肿瘤医学 2020(13)
- [22].IL-1信号通路参与全身型幼年特发性关节炎发病机制的研究进展[J]. 中日友好医院学报 2018(01)
- [23].葛根芩连汤对慢性牙周炎患者IL-1β水平的影响[J]. 国际检验医学杂志 2017(07)
- [24].IL-1家族在神经胶质瘤研究中的作用和意义研究进展[J]. 中国临床研究 2016(03)
- [25].镰刀菌毒素对断奶仔猪肠道IL-1β和IL-6分布和表达的影响[J]. 畜牧兽医学报 2016(10)
- [26].IL-1β在子痫前期早期诊断中的意义[J]. 泰山医学院学报 2015(01)
- [27].痰热清对急性放射性肺炎的干预作用及对(白细胞介素)IL-1影响研究[J]. 大家健康(学术版) 2015(14)
- [28].“改良三甲散”含药脑脊液对Aβ_(25-35)诱导海马神经神经元细胞损伤IL-1α、IL-1β和IL-6的影响[J]. 世界科学技术-中医药现代化 2014(05)
- [29].灵芪胶囊对S_(180)荷瘤小鼠IL-1和IL-6蛋白表达的影响[J]. 中国药师 2013(01)
- [30].实验性动物种植体周围炎龈沟液中IL-1β与IL-6的测定[J]. 中国现代药物应用 2013(04)
标签：动脉粥样硬化论文; 妊娠相关血浆蛋白论文; 阿托伐他汀论文;