猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

论文摘要

PRRS在世界范围内迅速蔓延而成为养猪业的重要威胁。2006年以来,“猪高热综合征”肆虐我国养猪业,高致病性猪蓝耳病是其主要致病病原之一。现有疫苗在免疫原性以及交叉保护性方面的作用均值得商榷,此外对于蓝耳病病毒的毒力因子的探寻仍无定论。本实验室拥有北美型经典弱毒PRRSV感染性克隆和中国第一株高致病性猪蓝耳病感染性克隆,构建了一系列结构蛋白嵌合感染性克隆,并获得嵌合病毒,为研究高致病性猪蓝耳病的毒力因子的定位和多价疫苗的研制奠定了基础。现将研究内容简述如下:1.PRRSV嵌合感染性克隆的构建高致病性蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性蓝耳病江西分离株（JX143）的主要结构蛋白基因（ORF4-7）以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12（ORF4-7-3′UTR）、p5NX12（ORF5-7-3′UTR）以及p56N12（ORF5-6）三个嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,同时对拯救病毒进行了病毒生物学特性分析,结果表明,嵌合病毒的生长曲线与亲本病毒差异相似。本研究成功构建了3个高致病性蓝耳病嵌合感染性克隆,并能拯救出活病毒,嵌合病毒在Marc-145细胞上能稳定传代。2.嵌合病毒疫苗候选株的免疫原性及保护性实验选取拯救病毒v56N12（ORF5-6）和vSX12（ORF4-7-3′UTR）免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值（IDEXX ELISA值s/p≥0.4）,免疫后28 d中和抗体效价从原来的1:5以下达到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28 d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续10d后消失,而对照组攻毒后至少持续13 d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的这三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一篇 文献综述
• 第一章 猪繁殖与呼吸综合征研究进展
• 第二章 猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展
• 第二篇 试验研究
• 第三章 PRRSV嵌合感染性克隆的构建
• 摘要
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 英文摘要
• 第四章 嵌合病毒疫苗候选株的免疫原性及保护性实验
• 摘要
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 英文摘要
• 全文总结
• 致谢