亚抑菌浓度抗菌药物对金黄色葡萄球菌耐药性及SOS基因表达的影响

论文摘要

目的探讨抗菌药物对金黄色葡萄球菌耐药性的发生、SOS系统在金黄色葡萄球菌耐药机制中的作用,探讨相应临床对策。方法（1）琼脂稀释法测定50株金黄色葡萄球菌,其中耐甲氧西林菌株（MRSA）30株、甲氧西林敏感菌株（MSSA）20株,对环丙沙星、阿米卡星、万古霉素的最小抑菌浓度（MIC）,探讨是否存在万古霉素MIC漂移或耐药,以及金葡菌对其他抗菌药物的敏感性；（2）选取标准株、环丙沙星耐药的MRSA、环丙沙星敏感的MSSA各1株。亚抑菌浓度（Sub-MIC）抗菌药物单一用药及联合用药：1/2MIC环丙沙星、1/2MIC阿米卡星、1/2MIC万古霉素、1/4MIC（环丙沙星+阿米卡星）、1/4MIC（环丙沙星+万古霉素）作用0h、6h、12h时获取菌株,SYBR实时定量PCR法测定SOS基因recA转录水平；（3）测定上述药物作用0h及12h时所有菌株对临床常用的12种抗菌药物的MIC水平,并分析MIC变化与recA表达之间的相关性关系；（4） Fisher确切概率法检测所得MIC值各组间差异的统计学意义,p<0.05判断为差异有意义。结果（1）50株菌株对环丙沙星、阿米卡星耐药率分别为65.40%、21.90%,对万古霉素均敏感,MIC分布范围为0.38～2.Omg/L。其中30株MRSA菌株中万古霉素MIC≤0.5mg/L的有13株,占43.33%%,lmg/L的有15株,占50.000%,2mg/L的有2株,占6.67%%；20株MSSA菌株中MIC为≤0.5mg/L的有11株,占55.000%,lmg/L的有9株,占45.000%。Fisher确切概率法描述MRSA与MSSA两组之间万古霉素MIC值差异无统计学意义（P=0.545>0.05）。所测MRSA菌株万古霉素MIC几何均值、MIC50、MIC90分别为0.78 mg/L、1 mg/L、1 mg/L,较2006年均值水平（0.5mg/L）、MIC50、（0.5 mg/L）、MIC90、（0.75 mg/L）显示存在万古霉素MIC漂移；（2）亚抑菌浓度环丙沙星、阿米卡星、万古霉素作用后均可诱导金黄色葡萄球菌SOS基因recA表达增加：标准株内分别增加59.3倍、8.3倍、4.3倍,耐药株内分别增加44.5倍、1.6倍、12.0倍。环丙沙星联合其他药物后较单一用药增加多降低,1/4MIC（环丙沙星+阿米卡星）作用recA转录增加3.4倍（标准株）、26.3倍（耐药株）,较环丙沙星单一作用降低约17.4倍（标准株）、1.7倍（耐药株）；1/4MIC（环丙沙星+万古霉素）作用recA转录增加3.3倍（标准株）、16.9倍（耐药株）,较环丙沙星单一作用降低约18.0倍（标准株）、2.6倍（耐药株）。但敏感株内药物作用前后recA转录均很低,未超出原代株水平。（3）亚抑菌浓度三种药物作用12小时后,标准株内环丙沙星及左氧氟沙星MIC增加2-4倍,苯唑西林及头孢曲松MIC增加1-2倍,阿米卡星MIC增加约2倍,其余7种抗菌药物MIC有0-2倍的增加,但均在敏感范围；耐药株内环丙沙星、阿米卡星、苯唑西林、头孢曲松、左氧氟沙星、利福平MIC增加≥1倍,仍然保持耐药,其余6种药物敏感性无明显变化；敏感株内12种抗菌药物MIC无明显变化。联合用药时较单一用药各药物MIC降低0-1倍。（4）相关性分析：标准株recA相对表达量与对应的环丙沙星MIC值之间相关系数r=0.772,p=0.072>0.05。即二者量值间无绝对相关性。但从单一菌株内分析可见,recA表达增加时诱导性药物引起自身及其他多种抗菌药物如β-内酰胺类MIC轻度增加,而recA转录低下时药物MIC无明显变化。结论（1）济南地区金黄色葡萄球菌临床分离株多表现为环丙沙星耐药,但对万古霉素均敏感,发现“MIC漂移”。（2）除氟喹诺酮类抗菌药物外,氨基糖苷类和万古霉素亚抑菌浓度作用亦可诱导金黄色葡萄球菌SOS基因recA表达增加。（3） recA表达增加时,诱导性药物引起自身及其他多种抗菌药物如β-内酰胺类M1C轻度增加,二者量值间无绝对相关性,即SOS系统参与金黄色葡萄球菌耐药。（4）联合用药可能作为RecA活性抑制剂减弱或阻止SOS基因表达。但对药物敏感性增加作用不显著,考虑存在其他作用更为显著的耐药机制,有待进一步探讨。

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