论文摘要
目的:研究携带hIL-24（人白细胞介素24）基因腺病毒载体对NCI-H460肺癌细胞体外抑癌增效及化疗增敏作用。方法:采用本室已构建的携带hIL-24基因表达的重组复制缺陷型腺病毒载体（Ad-polyA-promoter-hIL-24）感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定,用RT-PCR法鉴定IL-24基因转录。用50MOI的Ad-hIL-24作用于体外培养的人肺癌细胞NCI-H460,用RT-PCR法鉴定IL-24的转录;用MTT法评价Ad-hIL-24对细胞生长的影响,绘制出细胞生长曲线。通过流式细胞术（FCM）检测Ad-hIL-24对NCI-H460细胞细胞凋亡及周期的影响。用RT-PCR法分析凋亡相关因子Bax,Bcl-2,Caspase3及Survivin的变化,探讨Ad-hIL-24诱导肺癌细胞凋亡的主要机理。用Ad-hIL-24联合化疗药物顺铂（DDP）观察其对肺癌细胞化疗的增敏作用。MTT法检测两者联合作用后对NCI-H460细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测其对NCI-H460细胞凋亡及周期的影响。结果:Ad-hIL-24可在QBI-293A细胞中增殖,48h后在倒置显微镜下可见细胞变圆,呈葡萄状聚集,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,呈现高感染效率。RT-PCR检测可见IL-24基因成功转录。病毒效价为108 pfu/ml。Ad-hIL-24作用NCI-H460细胞后,RT-PCR结果显示目的基因可在NCI-H460细胞中成功转录,并能显著抑制NCI-H460细胞的生长,并呈现时间依赖性。该基因可诱导G1期减少、G2/M期阻滞和凋亡,其机制可能与Caspase3/survivin和Bax/Bcl-2比值升高有关。其凋亡机制与活化的Caspase3基因水平和Bax/Bcl-2比值升高有关。Ad-hIL-24感染NCI-H460细胞后,其基因对NCI-H460细胞具有明显的生长抑制作用和诱导细胞凋亡效应,具抑癌功能, Ad-polyA-promoter-hIL-24联合顺铂（DDP）,对NCI-H460细胞的生长抑制率和诱导细胞凋亡率均明显优于单一基因组和单一DDP化疗组,具有化疗增敏作用。结论:重组腺病毒Ad-polyA-promoter-hIL-24具有抑制NCI-H460肺癌细胞生长和诱导凋亡的抑癌和化疗增敏作用,可能是一种有效的肺癌基因治疗载体。
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