论文题目: 可卡因安非他明调节转录肽相互作用蛋白的筛选
论文类型: 博士论文
论文专业: 神经病学
作者: 陈娟
导师: 赵瑛,由振东,邵福源,周晖,赵忠新
关键词: 文库,细菌双杂交系统,蛋白蛋白间相互作用
文献来源: 第二军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: [摘要]目的:寻找可卡因安非他明调节转录肽（CART）受体或与其相互作用的蛋白。方法:建立大鼠脑cDNA文库,以CART41-102为诱饵,应用细菌双杂交方法筛选CART的相互作用蛋白。将得到的阳性结果进行DNA测序,进一步根据生物信息学方法分析阳性结果。结果:成功构建大鼠脑cDNA文库及诱饵质粒pBT-CART。文库容量为3.37×106,重组率98.5%。筛选约5.01×106个共转化克隆,得到阳性克隆125个,证实为阳性克隆93个,送测序93个。经生物信息学方法分析得到stathmin等6个可能与CART相互作用的蛋白,并得到可能与CART相互作用的未知新蛋白的DNA序列,它们与22个已知膜蛋白或受体有短的极相似片段。结论:细菌双杂交是一种鉴定蛋白质之间相互作用的简单而有效的方法。CART可能与stathmin等6个已知蛋白相互作用,并与22未知蛋白相互作用,这些未知蛋白与22个膜蛋白或受体有短的相似保守结构。
论文目录:
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中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
1.1 材料
1.1.1 菌种与载体
1.1.2 实验动物
1.1.3 主要实验仪器
1.1.4 各类实验试剂
1.1.5 常用缓冲液及其他溶液
1.1.6 培养液和固体培养基
1.2 方法
1.2.1 实验中常用的分子生物学方法
1.2.2 构建诱饵质粒pBT-CART_(41-102)
1.2.3 大鼠脑cDNA文库的构建与扩增
1.2.4 双杂交共转化及阳性克隆的鉴定
1.2.5 DNA序列分析
1.2.6 生物信息学分析
1.2.7 SDS-PAGE(三层)
结果
2.1 诱饵质粒pBT-CAR7_(41-102)的构建
2.2 大鼠脑pTRG-cDNA文库的建立
2.3 共转化阳性克隆的验证
2.4 生物信息学分析结果
2.5 免疫沉淀
讨论
3.1 STRATAGENE的细菌双杂交系统的原理与运用
3.2 cDNA文库的质量评价
3.3 可能与CART相互作用的蛋白
3.4 与CART相互作用的未知蛋白有相似结构的蛋白
小结
综述
参考文献
致谢
发布时间: 2006-05-08
参考文献
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标签：文库论文; 细菌双杂交系统论文; 蛋白蛋白间相互作用论文;