EPO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织Caspase-9和Caspase-3的影响

论文摘要

目的:新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic encephalopathy, HIBD）是由围生期窒息所引起的,常危及新生儿生命,也是导致儿童神经系统损伤的常见原因之一。近年来研究发现,促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）对缺氧缺血性脑损伤时的脑组织有保护作用,本实验通过建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,腹腔注射外源性重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin, rhEPO）,观察新生大鼠HIBD后脑组织病理变化,并观察EPO对新生大鼠HIBD时脑组织Caspase-9和Caspase-3表达的影响,探讨EPO对新生大鼠HIBD时脑组织产生的保护作用及产生这种保护作用的可能机制,以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的治疗方法。方法:（1）制备新生大鼠HIBD模型。（2）将新生7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组:假手术组,缺氧缺血组（HIBD组）,rhEPO治疗组,每组各40只,各组根据不同时间点又分成5个亚组:6h组,12h组,24h组,48h组,72h组,每亚组8只。假手术组给予颈正中切口游离左侧颈总动脉,不进行缺氧缺血;HIBD组游离并结扎左侧颈总动脉后置于低氧环境中2h; rhEPO治疗组于缺氧缺血后立即腹腔注射rhEPO（5000U/kg/d）。各组新生大鼠于相应时间点断头取脑组织后肉眼观察脑组织大体形态的改变,石蜡切片行HE染色光镜下观察左侧脑组织病理变化,免疫组织化学方法检测三组大鼠不同时间点左侧脑组织Caspase-9和Caspase-3表达。结果:（1）缺氧缺血后可见左侧脑组织大体有不同程度的水肿,rhEPO治疗后水肿在一定程度上有所减轻。（2）HE染色:假手术组脑组织结构及细胞层次清晰,神经元排列整齐紧密,仅见个别细胞体积缩小,核深染;HIBD组各时间点出现不同程度的神经细胞肿胀,变性,坏死,细胞核碎裂,溶解,神经元数目减少,胶质细胞增生;rhEPO治疗组各时间点损伤程度较HIBD组有所减轻,神经细胞存活数量多,细胞排列尚规则,仅见少量神经细胞变性坏死。（3）免疫组织化学染色:①Caspase-9表达:Caspase-9阳性染色呈棕黄色的细颗粒沉积,阳性细胞广泛表达于大脑皮层和海马,阳性着色于神经元胞浆和胞核内均可见,在假手术组呈低水平表达,各时间点无明显变化;HIBD组Caspase-9的表达在缺氧缺血6h即增强,12h时逐渐升高,24～72h维持在高峰水平（P<0.05）;rhEPO治疗组各时间点Caspase-9阳性颗粒染色较HIBD组染色浅,数量有所下降,阳性细胞平均灰度值较HIBD组高,差异均有统计学意义（all P<0.01）。②Caspase-3表达:Caspase-3阳性染色呈棕黄色细颗粒沉积,阳性细胞广泛表达于大脑皮层和海马,阳性着色于神经元胞浆和胞核内均可见,Caspase-3在假手术组低水平表达;HIBD组Caspase-3的表达在缺氧缺血6h即增强,12h时逐渐升高,24～48h达高峰,72h稍有降低（P<0.05）;rhEPO治疗组各时间点Caspase-3阳性颗粒染色较HIBD组染色浅,数量有所下降,阳性细胞平均灰度值较HIBD组高,差异均有统计学意义（all P<0.01）。结论:（1）通过对缺氧缺血后新生大鼠脑组织大体观及病理学观察,证实新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型建立成功,HIBD组Caspase-9和Caspase-3的表达较假手术组有所增加,说明Caspase-9和Caspase-3参与了新生大鼠脑组织HIBD的发生发展过程。（2）rhEPO可下调Caspase-9和Caspase-3的表达,从而发挥对缺氧缺血性脑损伤时脑组织的保护作用,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供新的途径。

论文目录

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• 实验材料与方法
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