鼻咽癌中微卫星不稳定与错配修复基因启动子甲基化研究

论文摘要

错配修复缺陷在大多数癌症中被发现,hMSH2和hMLH1是错配修复过程中最为重要2个人类错配修复基因,其失活主要原因是启动子CpG岛甲基化或基因突变,错配修复缺陷表现为微卫星序列改变,非编码区的微卫星序列改变表现为微卫星不稳定,在编码区的微卫星序列改变表现为该基因移码突变而导致其失活。在本实验研究中,我们用PCR-单链构象多态性的方法检测54例鼻咽癌组织中7个微卫星位点的微卫星不稳定,结果显示微卫星不稳定发生率为70.37%,复制错误阳性率为44.44%,表明鼻咽癌可能存在错配修复缺陷。我们进一步分析了微卫星不稳定与鼻咽癌患者临床病理特征的关系,结果发现微卫星不稳定多见于鼻咽癌临床早期和无淋巴结转移患者。为了明确鼻咽癌中是否存在错配修复缺陷,我们用半定量逆转录PCR的方法检测了鼻咽癌细胞株及活检肿瘤组织,正常鼻咽细胞株及正常鼻咽组织中hMSH2和hMLH1基因的转录表达水平,并用甲基化特异性PCR及亚硫酸氢盐测序的方法检测了上述样本中hMSH2和hMLH1基因的甲基化状态,我们发现80%的鼻咽癌细胞株中hMSH2转录表达下调,鼻咽癌组织中hMSH2的转录表达水平亦显著低于正常鼻咽组织中的水平;而在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中hMLH1转录表达均无明显下调。hMSH2基因启动子区CpG岛甲基化可在80%鼻咽癌细胞株及75.9%原发肿瘤中检测到;hMLH1基因启动子CpG岛甲基化可在80%的鼻咽癌细胞株及42.59%的原发肿瘤中检测到。hMSH2和hMLH1基因在正常鼻咽上皮细胞株及正常鼻咽组织中则全为非甲基化。在鼻咽癌组织中,hMSH2甲基化的病例其转录表达水平显著低于非甲基化病例。这些结果说明hMSH2基因转录表达水平与其甲基化状态相关,我们进一步用甲基转移酶抑制剂5-aza-dC处理hMSH2失活的鼻咽癌细胞株,结果发现5-aza-dC能完全恢复这些细胞hMSH2的转录表达,说明启动子CpG岛甲基化是鼻咽癌中hMSH2转录表达失活的直接原因。在鼻咽癌组织中,hMLH1甲基化的病例其转录表达水平稍低于非甲基化病例,但二组比较并无统计学差异,表明hMLH1基因转录表达水平与其甲基化状态无明显相关。进一步分析我们发现hMSH2和hMLH1基因甲基化状态和临床病理特征均无明显相关。为了验证鼻咽癌中微卫星不稳定是否和错配修复缺陷直接相关,我们分析了hMSH2和hMLH1基因启动子CpG岛甲基化与微卫星不稳定的关系,结果显示NPC患者中hMSH2启动子区CpG岛DNA甲基化与微卫星不稳定明显相关,而hMLH1启动子区CpG岛DNA甲基化与微卫星不稳定无明显相关,表明hMSH2而非hMLH1启动子区CpG岛DNA甲基化是引起微卫星不稳定的主要直接原因。总之,我们的结果说明鼻咽癌是一个错配修复缺陷的肿瘤,微卫星不稳定是鼻咽癌的一个早期频发事件,微卫星不稳定多见于无淋巴结转移鼻咽癌患者。hMSH2在鼻咽癌中由于启动子CpG岛DNA甲基化而失活,hMSH2失活是引起鼻咽癌组织的微卫星不稳定的主要原因,hMSH2是一个鼻咽癌相关的潜在肿瘤抑制基因。

论文目录

• 缩略词表
• 论文摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 前言
• 第一部份 鼻咽癌中微卫星不稳定研究
• 1 实验材料与方法
• 2 实验程序
• 3 实验结果
• 4 小结
• 5 讨论
• 第二部分 鼻咽癌中错配修复基因转录表达及其启动子甲基化状态研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 小结
• 4 讨论
• 第三部分 鼻咽癌中微卫星不稳定与错配修复基因启动子甲基化研究
• 1 材料和方法
• 2 统计学分析
• 3 结果
• 4 小结
• 5 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 综述一:人类DNA错配修复系统及其错配修复机制
• 综述二:DNA异常甲基化与鼻咽癌
• 综述三:恶性肿瘤中微卫星不稳定与错配修复基因
• 攻读学位期间发表的论文题录
• 致谢