论文摘要
[研究背景和目的]微RNA（microRNA, miRNA）是一类对基因进行转录后水平调控的小分子非编码RNA,参与多种生理和病理过程。近来研究表明,某些miRNA具有癌基因或抑癌基因活性,这些miRNA能够通过负性调节其靶基因的表达水平,在肿瘤发生和发展过程中发挥重要作用。本实验室利用寡核苷酸微阵列技术,发现在人胃腺癌组织中microRNA-27a（miR-27a）表达水平发生明显上调。本课题进一步研究miR-27a对胃腺癌细胞生长表型的影响,并确定miR-27a直接作用的靶基因,以阐明miR-27a对胃腺癌发生和发展发挥作用的分子机制。[方法]在人胃腺癌细胞系MGC803细胞中,封闭内源性miR-27a的功能后,利用MTT实验和集落形成实验检测细胞生长活性的变化。而后综合利用生物信息学方法和cDNA微阵列技术筛选miR-27a的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证miR-27a对靶基因的直接调控作用。通过半定量RT-PCR和Westernblot检测miR-27a功能受抑制的胃癌细胞或组织中靶基因mRNA和蛋白水平的表达变化,进一步验证miR-27a对靶基因的调控作用。[结果]在MGC803细胞中,封闭miR-27a的功能后,细胞生长明显受抑制,且集落形成能力明显降低。靶基因筛选结果表明,作为一种抑癌基因,抑素（prohibitin）是miR-27a的候选靶基因,其3’非翻译区包含miR-27a的潜在结合位点。荧光报告载体实验证实,miR-27a能够通过作用于prohibitin基因的3’非翻译区的特定位点,对其表达进行负性调节。而在miR-27a功能受抑制的胃癌细胞或组织中,prohibitin基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显升高。[结论]在胃腺癌细胞中,miR-27a能够促进细胞增殖,起到癌基因的作用。在胃腺癌中高表达的miR-27a能够下调抑癌基因prohibitin的表达水平,使prohibitin的抗增殖活性减低,造成细胞生长速度加快。通过阐明miR-27a在胃腺癌中的具体作用机制有利于我们对恶性肿瘤的发生和发展进行深入的了解,同时也为肿瘤诊断和治疗提供新的线索。