龙须菜藻红蛋白抗肿瘤作用及其机制的研究

论文摘要

本文研究了汕头南澳海域龙须菜（Gracilaria Lemaneiformis）藻红蛋白（Phycoerythrin,PE）的抗肿瘤活性。通过建立肿瘤小鼠模型,研究藻红蛋白对肝癌细胞H22的抗肿瘤作用,并探讨藻红蛋白对H22荷瘤小鼠免疫作用的影响和对肿瘤组织p53等基因表达的影响,对体外培养的肿瘤细胞H22生长的抑制作用以及对肿瘤抑制基因p53表达的影响,以揭示其抗肿瘤机制。小鼠体内抗肿瘤实验结果显示:经口灌胃给予PE,当给药剂量是300 mg/kg·d时,抑瘤率达到30.23%;对荷瘤小鼠红细胞中超氧化物岐化酶（SOD）活性和肝匀浆中过氧化脂质（LPO）含量的测定结果表明,PE具有提高机体抗氧化能力的作用;PE对胸腺、脾脏等免疫器官有很好的保护作用,PE能提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞对ConA的增殖反应,增强巨噬细胞吞噬活性和NK细胞杀伤活性以及红细胞对肿瘤细胞的黏附性,并能促进TNF-α的分泌。利用半定量RT-PCR法探讨了PE对H22荷瘤肿瘤小鼠肿瘤组织中p53和Caspese-3基因转录水平的影响。结果表明,PE能促进肿瘤组织中肿瘤抑制基因p53和与凋亡相关的蛋白水解酶Caspese-3基因的表达,说明在体内PE具有促进肿瘤抑制基因表达,从而抑制肿瘤生长,甚至导致肿瘤细胞凋亡。采用细胞生长曲线法检测PE对体外培养的H22肿瘤细胞的影响,结果显示PE对H22肿瘤细胞没有抑制作用。试验结果提示,PE具有的抗肿瘤活性不是直接对H22细胞的作用,可能是通过促进肿瘤组织中肿瘤抑制基因p53和与凋亡相关的蛋白水解酶Caspese-3基因的表达、提高机体免疫力和抗氧化作用得以实现的。本文还初步探讨了龙须菜多糖（PGL）的免疫活性,利用环磷酰胺建立免疫低下小鼠模型（IDMM）,研究PGL对IDMM免疫的调节作用。结果表明,PGL具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用,但这种作用无量效关系,与多糖所含硫酸基也无直接联系。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第1章 前言
• 1.1 龙须菜及藻胆蛋白研究现状
• 1.2 天然活性物质对免疫影响及肿瘤免疫研究进展
• 1.2.1 天然活性物质对细胞免疫的影响
• 1.2.2 天然活性物质对细胞因子的影响
• 1.3 p53蛋白与肿瘤凋亡研究
• 1.4 本文研究内容
• 1.4.1 体外实验
• 1.4.2 体内实验
• 1.5 本文的研究目的及意义
• 22荷瘤小鼠免疫力的影响'>第2章 龙须菜藻红蛋白抗肿瘤作用及对H₂₂荷瘤小鼠免疫力的影响
• 2.1 实验材料和主要仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 22荷瘤小鼠模型的建立'>2.2.1 H₂₂荷瘤小鼠模型的建立
• 2.2.2 小鼠分组及给药
• 2.2.3 抑瘤率及器官指数的计算
• 2.2.4 PE对荷瘤小鼠红细胞SOD的作用
• 2.2.5 PE对荷瘤小鼠肝脏LPO的作用
• 2.2.6 PE对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞红细胞吞噬率的作用
• 2.2.7 PE对荷瘤小鼠红细胞粘附性的作用
• 2.2.8 PE对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力的作用
• 2.2.9 PE对荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性的作用
• 2.2.10 PE对荷瘤小鼠脾脏细胞分泌TNF-α的作用
• 2.2.11 实验数据统计
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 PE对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用
• 2.3.2 PE对荷瘤小鼠免疫器官指数的影响
• 2.3.3 PE对荷瘤小鼠红细胞SOD活力及肝匀浆LPO含量的影响
• 2.3.4 PE对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞红细胞吞噬率的影响
• 2.3.5 PE对荷瘤小鼠红细胞粘附性的影响
• 2.3.6 PE对荷瘤小鼠脾细胞增殖转化的影响
• 2.3.7 PE对荷瘤小鼠NK细胞杀伤力的影响
• 2.3.8 PE对荷瘤小鼠产生TNF-α的影响
• 2.4 小结
• 第3章 龙须菜藻红蛋白对小鼠肿瘤p53等基因转录的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 主要仪器
• 3.2 实验方法
• 22荷瘤小鼠模型的建立'>3.2.1 H₂₂荷瘤小鼠模型的建立
• 3.2.2 小鼠分组及给药
• 3.2.3 小鼠的处理
• 22肿瘤抑制基因p53转录活性的作用'>3.2.4 PE对H₂₂肿瘤抑制基因p53转录活性的作用
• 22肿瘤凋亡相关基因Caspase-3转录活性的作用'>3.2.5 PE对H₂₂肿瘤凋亡相关基因Caspase-3转录活性的作用
• 3.3 结果与分析
• 22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用'>3.3.1 PE对H₂₂荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用
• 3.3.2 RNA完整性
• 3.3.3 PE对荷瘤小鼠肿瘤p53基因转录的影响
• 3.3.4 PE对荷瘤小鼠肿瘤Caspase-3基因转录的影响
• 3.4 小结
• 22细胞体外作用及对p53等基因转录的影响'>第4章 龙须菜藻红蛋白对H₂₂细胞体外作用及对p53等基因转录的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 主要仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 细胞的制备
• 22细胞增殖的作用'>4.2.2 PE对H₂₂细胞增殖的作用
• 22肿瘤细胞p53和Caspese-3基因转录水平的作用'>4.2.3 PE对H₂₂肿瘤细胞p53和Caspese-3基因转录水平的作用
• 4.2.4 数据分析
• 4.3 结果与讨论
• 22细胞增殖的影响'>4.3.1 PE对H₂₂细胞增殖的影响
• 22细胞p53和Caspase-3基因表达的影响'>4.3.2 PE对H₂₂细胞p53和Caspase-3基因表达的影响
• 4.4 小结
• 第5章 龙须菜多糖对免疫低下小鼠免疫的调节作用
• 5.1 实验材料和主要仪器
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 主要仪器
• 5.1.3 主要试剂
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 免疫低下小鼠模型的建立
• 5.2.2 小鼠分组及给药
• 5.2.3 PGL对器官指数的作用
• 5.2.4 PGL对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性的作用
• 5.2.5 PGL对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力的作用
• 5.2.6 PGL对免疫低下小鼠NK细胞杀伤力的作用
• 5.2.7 PGL对免疫低下小鼠胸腺淋巴细胞增殖能力的作用
• 5.2.8 实验数据统计
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 PGL对免疫低下小鼠免疫器官指数的影响
• 5.3.2 PGL对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响
• 5.3.3 PGL对免疫低下小鼠脾脏细胞增殖转化的影响
• 5.3.4 PGL对免疫低下小鼠脾脏NK细胞杀伤力的影响
• 5.3.5 PGL对免疫低下小鼠胸腺细胞增殖转化的影响
• 5.4 小结
• 参考文献
• 致谢
• 本人简历