亚慢性镉中毒致鸡血管损伤机制的研究

论文摘要

本试验以育成母鸡为试验动物,在饲料中添加不同浓度的镉,复制鸡亚慢性镉中毒模型。通过对试验鸡的临床表现及主动脉、前腔静脉的病理变化、超微结构变化的观察,以及氧化应激、细胞凋亡及鸡血管内MT含量、MTmRNA表达水平等方面的检测,探讨了镉对育成母鸡的血管毒理机制。研究结果表明:1.通过显微和超微结构的观察,证实镉能够导致鸡血管发生损伤,使鸡发生动脉粥样硬化、静脉损伤。不同剂量染镉后,病理组织结构变化的差异为判断和分析镉中毒效应提供了充分的形态学依据。2.镉能够导致GSH-Px和SOD活性降低、MDA含量升高及NOS活性与NO含量升高,破坏了机体抗氧化防御系统及清除自由基功能,造成鸡血管组织发生氧化损伤。3.通过酶组织化学的检测,证明镉能影响血管组织酶活性,即CO、SDH、ALP、G-6-Pase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATP活性下降,ACP活性升高,干扰血管组织代谢。4.镉能降低血清中的E2、P4、GH的分泌量,导致内分泌紊乱,影响血管功能,并且存在剂量-时间效应。5.通过病理学观察及原位末端标记（TUNEL）等检测,从形态学证实镉能够引起鸡血管组织内皮细胞及平滑肌细胞凋亡。6.低剂量镉能够升高主动脉、前腔静脉MTmRNA的表达水平,高剂量镉能够升高主动脉、而降低前腔静脉MTmRNA的表达水平,镉暴露后低剂量组血管MT含量有明显的增加,但高剂量组不但未见增加而稍有下降,镉的毒性与MT耗竭有关,这可能是镉的血管毒理机制之一。综上所述,镉中毒可以引起鸡血管组织氧化损伤,破坏组织酶活性,干扰MTmRNA的表达,降低血清中的E2、P4、GH的含量,诱导鸡血管组织EC及VSMC细胞凋亡,导致主动脉粥样硬化、前腔静脉损伤,造成血管病理学损伤。本试验从器官、细胞、亚细胞和分子水平较系统地研究了镉对鸡的血管毒性作用,探讨了镉致鸡血管毒理机制,为环境毒理学的研究及镉中毒的系统防治提供了理论依据,对提高人类的环境保护意识、促进畜牧业健康发展、保障家畜和人类的健康有着十分深远的意义。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 镉对血管毒性的研究现状
• 1.1.1 镉对血管的损害
• 1.1.2 镉与高血压
• 1.1.3 镉与动脉粥样硬化
• 1.2 血管毒理机制的研究进展
• 1.2.1 血管损伤与NOS-NO 系统
• 1.2.2 血管损伤与氧化应激
• 1.2.3 血管损伤与机体某些激素
• 1.2.4 血管损伤与金属硫蛋白
• 1.3 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验动物及样品处理
• 2.2 主要仪器与试剂
• 2.2.1 主要仪器
• 2.2.2 主要试剂
• 2.3 试验检测项目与方法
• 2.3.1 临床症状检查
• 2.3.2 病理学检查
• 2.3.3 血清及血管组织中镉含量的检测
• 2、P₄、GH 含量的检测'>2.3.4 血清E₂、P₄、GH 含量的检测
• 2.3.5 血清及血管组织抗氧化功能指标的检测
• 2.3.6 血管组织ATP 代谢的检测
• 2.3.7 血管组织中几种酶的组织化学检测
• 2.3.8 血管细胞凋亡的检测
• 2.3.9 血管组织中金属硫蛋白含量的检测
• 2.3.10 半定量RT-PCR 法测定血管内MTmRNA 的表达
• 2.4 试验数据的分析与统计
• 3 结果与分析
• 3.1 临床症状观察
• 3.2 病理学检查结果
• 3.2.1 病理剖检结果
• 3.2.2 病理组织学检查结果
• 3.2.3 组织超微结构观察结果
• 3.3 镉含量的测定结果
• 3.3.1 血清中镉含量的测定结果
• 3.3.2 血管中镉含量的测定结果
• 3.4 血清中激素含量检测结果
• 2 含量的测定结果'>3.4.1 血清中E₂含量的测定结果
• 4 含量的测定结果'>3.4.2 血清中P₄含量的测定结果
• 3.5 血清和血管匀浆内NO 含量的测定结果
• 3.5.1 血清和血管匀浆中NO 含量的测定结果
• 3.5.2 血清和血管匀浆NOS 活性的测定结果
• 3.6 血清和血管匀浆抗氧化功能的测定结果
• 3.6.1 血清和血管匀浆GSH-Px 活性的测定结果
• 3.6.2 血清和血管匀浆中SOD 活性的测定结果
• 3.6.3 血清和血管匀浆中MDA 含量的测定结果
• 3.7 血管匀浆中ATPase 活性的测定结果
• +-K⁺-ATPase 活性的测定结果'>3.7.1 血管中Na⁺-K⁺-ATPase 活性的测定结果
• 2+-ATPase 活性的测定结果'>3.7.2 血管匀浆Ca²⁺-ATPase 活性的测定结果
• 2+-ATPase 活性的测定结果'>3.7.3 血管匀浆Mg²⁺-ATPase 活性的测定结果
• 3.8 鸡血管组织内几种酶组织化学的检测结果
• 3.9 TUNEL 法检测血管细胞凋亡的结果
• 3.10 鸡血管组织金属硫蛋白含量的测定结果
• 3.11 鸡血管组织MTmRNA 表达水平的测定结果
• 3.11.1 鸡血管内总RNA 提取的结果
• 3.11.2 鸡血管MT 及β-actin mRNA 的鉴定结果
• 3.11.3 最佳PCR 条件的摸索结果
• 3.11.4 鸡血管 MT 表达的检测结果
• 4 讨论
• 4.1 育成母鸡亚慢性镉中毒模型的建立
• 4.2 镉致血管损伤的病理学变化
• 4.3 镉对鸡体性腺分泌激素含量的影响
• 4.4 镉对鸡体内NO 代谢的影响
• 4.5 镉对血管中抗氧化系统的影响
• 4.6 镉对血管组织酶活性的影响
• 4.7 镉对血管金属硫蛋白的影响
• 4.8 镉对血管细胞凋亡的影响
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士期间发表的学术论文