运脾止泻颗粒复方的非临床幼龄动物毒理学研究

论文摘要

儿童正处于生长发育的特殊时期,器官的生理功能尚未发育成熟;在机体成分,生理功能,药物的吸收、分布、蛋白结合、代谢及排泄等药物处置动力学以及对药物的毒性敏感性等方面,均存在儿童与成年之间的差异。但是,在传统的儿科药物评价中,均未对儿科药物的安全性进行过适当的评价。近十余年来,儿童药物的开发范式业已发生了明显的转变。随着国际性和国家性儿科临床试验规范化法律和法规的出台,儿科药物临床研究的质量与数量都得到了明显的提升。与此同时,药政管理部门也越来越多地要求申报幼龄动物毒理学研究资料,其对儿科药物的开发及临床风险评价也具有越来越重要的理论与实际意义。西方发达国家幼龄动物毒理学实验指导原则基本成熟,但国内的临床前安评机构尚缺乏开展幼龄动物非临床安全性评价的经验,国家食品药品监督管理局也尚未制订《幼龄动物非临床安全性评价》方面的指导原则。为此类试验提供非临床安全性方面的数据资料支持也是目前迫切需要解决的问题。运脾止泻颗粒复方为北京首医科技有限公司开发的新型药物,配方主要有肉豆蔻、茯苓、丁香、赤石脂等,用于治疗小儿腹泻,已经在北京儿童医院应用于小儿腹泻病的临床治疗。北京首医科技有限公司的专家学者已对其药理学进行了较广泛深入的研究,但毒理学研究较少。为了评价运脾止泻颗粒复方在儿科用药的安全性,为临床试验提供安全性的资料,本研究开展了运脾止泻颗粒复方的幼龄大鼠重复给药毒性研究及成年大鼠与幼龄大鼠的急性毒性比较研究。研究目的为评价幼龄动物染毒后潜在的生长发育和行为毒性和一般毒性表现,确定其毒性作用的无损害反应水平（NOAEL）,为制订该产品临床用药方案提供一般毒性评价和儿科用药的临床前实验资料。急性毒性试验中,我们对成年大鼠和PND14的仔鼠各自分组,设对照组和给药组,分别单次给药,剂量为12g/kg。给药后观察2周,观察的内容包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主活动及中枢神经系统行为表现等。结果表明,幼龄及成年大鼠单次灌胃给药12g/kg运脾止泻颗粒复方,对动物的临床体征及大体尸检观察均未见影响;但是,运脾止泻颗粒复方对幼龄动物体重的影响要明显强于成年动物,可明显减低幼龄动物在给药后的体重增长。且雄性幼龄动物更为敏感。长期毒性试验中,共设12g/kg、4g/kg、1.33g/kg三个染毒剂量组和一个溶剂对照组,在幼龄大鼠出生后第10天首次给药,每天一次,连续灌胃给药13周。每天记录母鼠的授乳、做窝、养仔等行为和仔鼠的外观、行为方面的异常体征,断乳前每天称1次仔鼠体重,断乳后每周称2次仔鼠体重。GD10至断乳日称重母鼠体重4次。定期检测摄食量,在不同时间检查幼龄大鼠的生长发育和反射发育情况,包括:下门齿萌出、睁眼、张耳、睾丸下降、包皮分离、阴道张开、空中翻正反射、听觉惊愕反射、负趋地性反射。于PND50进行大鼠的自发活动检查。在PND100进行仔鼠的生殖功能检查。于给药中期（48只）,给药期结束（48只）和恢复期结束（96只）对动物进行血液学、血液生化学和组织病理学检查。实验结果表明,幼龄大鼠灌胃运脾止泻颗粒复方,其毒性表现为高剂量下动物在哺乳期及断乳后前2周出现体重增长变缓,拉黄色稀便、局限性脱毛等临床体征,母鼠及仔鼠哺乳期摄食量下降以及仔鼠睁眼发育延缓等。运脾止泻颗粒复方染毒对幼龄大鼠的自发活动、其它的生长及反射指标、动物的交配能力以及骨密度及临床病理学分析等则均未见明显的影响。给药13周后,12、4 g/kg/天剂量可致雄性大鼠发生α2μ-球蛋白肾病综合症,1.33 g/kg/天剂量则仅发生α2μ-球蛋白肾病综合症前期的肾小管萎缩等轻度改变。停药4周后,12、4 g/kg/天剂量组动物α2μ-球蛋白肾病综合症未见明显恢复,1.33 g/kg/天剂量组动物肾小管萎缩完全恢复。运脾止泻颗粒复方各剂量下对雌性大鼠肾脏未见明显毒性损害作用,对雌、雄大鼠肾脏以外脏器组织未见明显病理损害作用。综合以上实验结果,在本实验所确定的条件下,SD大鼠灌胃染毒润脾止泻颗粒复方共13周,其一般毒性的最低可观察到损害作用水平（LOAEL）为1.33g/kg。若除外无人类相关性的雄性大鼠α2μ-球蛋白肾病综合症,其一般毒性的最大未观察到损害作用水平（LOAEL）为4g/kg。幼龄动物毒理学实验应按照相关指导原则的要求,针对供试品的药理学、药代动力学特征,以个案处理为原则,进行合理的设计与严格的实施;实施过程中应处理好动物给药、分组设计、统计学处理等方面的难点。本研究参考美国FDA和欧洲药品评价局（EMEA）有关儿科药物非临床安全评价的指导原则,以润脾止泻颗粒复方为受试药品,以幼龄大鼠为实验模型,通过此项幼龄动物研究为未来开展相关研究积累了相关的技术操作经验和基础数据（幼龄大鼠的血液学、临床化学、病理学）,为国内《幼龄动物非临床安全性评价》指导原则的尽快出台提供了借鉴。研究中首次发现中药复方制剂可诱发雄性大鼠α2μ-球蛋白肾病;在开展中药复方临床前安全性评价实验时应予以鉴别与分析。通过运脾止泻颗粒复方的幼龄大鼠毒理学实验,本中心已基本具备开展幼龄大鼠毒理学实验的经验、设备和条件。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 大鼠灌胃运脾止泻颗粒复方急性毒性试验
• 1 材料与方法
• 2. 结果
• 2.1 一般生理指标观察
• 2.2 大体病理组织学检查
• 2.3 讨论
• 第二章 幼龄大鼠灌胃运脾止泻颗粒复方重复给药 周毒性试验
• 1 材料与方法
• 2 结果与讨论
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 论著
• 个人简历
• 致谢